大鼠肝癌細(xì)胞高增殖亞群生物學(xué)與耐藥特征實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討大鼠肝癌中是否存在增殖能力不同細(xì)胞，并初步研究高增殖能力細(xì)胞亞群生物學(xué)特征，比較與肝癌細(xì)胞藥敏特征的差異。 方法：1、有限稀釋法單克隆培養(yǎng)大鼠肝癌細(xì)胞，找出不同可增殖的肝癌細(xì)胞亞群(HSG-1、HSG-2)，并對(duì)他們的細(xì)胞生長(zhǎng)特征、細(xì)胞周期分布、成瘤能力以及持續(xù)培養(yǎng)下分化能力等生物學(xué)特征進(jìn)行研究。2、取HSG-2與肝癌細(xì)胞，阿霉素(0.2μg/mL)、氟尿嘧啶(5μg/mL)及順鉑(1μg/mL)作用72h后，SRB法

2、分別檢測(cè)化療藥物對(duì)HSG-2與肝癌細(xì)胞的抑制率。 結(jié)果：(1)共有6只大鼠培養(yǎng)出比較穩(wěn)定的能持續(xù)增殖亞群，其中穩(wěn)定出現(xiàn)的2個(gè)亞群分別命名為HSG-1與HSG-2；(2)HSG-2細(xì)胞倍增時(shí)間、最大增生倍數(shù)、細(xì)胞周期分布均有顯著性差異。(3)HSG-2細(xì)胞成瘤比例為100％，1/10對(duì)數(shù)稀釋后，成瘤比例為50％，與對(duì)應(yīng)亞群原密度接種為0的比較，P=0.001；P=0.023，均有顯著性差異。(4)HSG-2細(xì)胞亞克隆培養(yǎng)，產(chǎn)生的子

3、代克隆集落出現(xiàn)了形態(tài)異質(zhì)性的細(xì)胞，同樣產(chǎn)生梭形及多角形細(xì)胞；將多角形克隆集落轉(zhuǎn)種植到24孔板擴(kuò)大培養(yǎng)可見到同上兩種不同形態(tài)的細(xì)胞集落，而HSG-1細(xì)胞亞克隆培養(yǎng)未能產(chǎn)生多角形子代細(xì)胞。HSG-2亞克隆的子代多角形細(xì)胞種植到裸鼠皮下，成瘤率也達(dá)100％(6/6)；而HSG-2子代梭形細(xì)胞種植到裸鼠皮下未見成瘤。(5)阿霉素，氟尿嘧啶與順鉑對(duì)肝癌大鼠HSG-2抑制率與對(duì)肝癌細(xì)胞抑制率比較有顯著性差異，t值與P值分別為：t=4.321，P=0

4、.002；t=4.965，P=0.001與t=4.285，P=0.002。(6)阿霉素、氟尿嘧啶、順鉑對(duì)肝癌大鼠HSG-2的IC50與對(duì)肝癌細(xì)胞IC50比較有顯著性差異，t值與P值分別為：t=10.604，P<0.001；t=5.642，P<0.001與t=9.470，P<0.001。 結(jié)論：HSG-2細(xì)胞增殖能力低、致瘤能力強(qiáng)，有一定分化能力，具備大鼠肝癌干細(xì)胞的初步特征?；熕幬飳?duì)肝癌大鼠HSG-2抑制小于對(duì)肝癌細(xì)胞抑制，提