大鼠顱底發(fā)育中軟骨聯(lián)合細(xì)胞凋亡及增殖的研究.pdf

1、第一部分大鼠發(fā)育中顱底軟骨聯(lián)合組織形態(tài)學(xué)觀察目的：研究大鼠發(fā)育中不同時(shí)期顱底軟骨聯(lián)合的組織學(xué)特征。 方法：選用出生后4d、8d、16d、32d、48d、64d及128d的SD大鼠，取顱底軟骨聯(lián)合組織(蝶骨間軟骨聯(lián)合(Inter-sphenoid synchondrosis,iss)和蝶枕軟骨聯(lián)合(Spheno-occipital synchondrosis,sos))，行HE染色，對(duì)軟骨聯(lián)合采用組織學(xué)和計(jì)量形態(tài)學(xué)觀測(cè)。

2、結(jié)果：軟骨聯(lián)合可分為4區(qū)：靜止區(qū)，增殖區(qū)，肥大區(qū)，交界區(qū)，其細(xì)胞具有各自的形態(tài)特征。隨著鼠齡的增加，軟骨聯(lián)合的總寬度逐漸減小。發(fā)育早期(4d-16d)，靜止區(qū)、增殖區(qū)細(xì)胞層數(shù)較多，厚度較大，到了發(fā)育中后期(32d-128d)，則靜止區(qū)、增殖區(qū)細(xì)胞退化，而肥大區(qū)軟骨細(xì)胞生長(zhǎng)活躍。蝶枕軟骨聯(lián)合細(xì)胞區(qū)的量變晚于蝶骨間軟骨聯(lián)合。 結(jié)論：大鼠軟骨聯(lián)合發(fā)育由快速增長(zhǎng)為主轉(zhuǎn)變成組織改建為主的轉(zhuǎn)折期可能是在32d-48d。蝶枕軟骨聯(lián)合的生長(zhǎng)發(fā)育

3、和組織改建，持續(xù)的時(shí)間長(zhǎng)于蝶骨問(wèn)軟骨聯(lián)合，融合時(shí)間晚于蝶骨間軟骨聯(lián)合。 第二部分大鼠發(fā)育中顱底軟骨聯(lián)合細(xì)胞增殖和凋亡的研究目的：研究大鼠生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中顱底軟骨聯(lián)合細(xì)胞增殖和凋亡現(xiàn)象。 方法：選用出生后4d、8d、16d、32d、48d、64d及128d的SD大鼠，取顱底軟骨聯(lián)合組織(蝶骨間軟骨聯(lián)合(iss)和蝶枕軟骨聯(lián)合(SOS))。行增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)免疫組織化學(xué)染色標(biāo)記增殖細(xì)胞，末端脫核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUT

4、P缺口標(biāo)記技術(shù)(TUNEL法)標(biāo)記凋亡細(xì)胞，比較觀察不同時(shí)間軟骨聯(lián)合細(xì)胞增殖和凋亡的表達(dá)情況。 結(jié)果：在出生后4d、8d及16d的大鼠有大量PCNA陽(yáng)性細(xì)胞存在于軟骨聯(lián)合，而32d、48d、64d及128d的軟骨聯(lián)合區(qū)僅有少量陽(yáng)性細(xì)胞，但軟骨聯(lián)合兩側(cè)的骨小梁之間陽(yáng)性細(xì)胞較多，蝶骨間和蝶枕軟骨聯(lián)合之間沒(méi)有顯著性差異。在出生后4d、8d、16d的大鼠軟骨聯(lián)合肥大區(qū)，交界區(qū)發(fā)現(xiàn)少數(shù)凋亡細(xì)胞；而32d、48d及64d的軟骨聯(lián)合的肥大區(qū)、

5、交界區(qū)和兩側(cè)的骨小梁之間有較多散在的黃色熒光凋亡細(xì)胞，并隨時(shí)間推移凋亡細(xì)胞逐漸增多；但128d的大鼠幾乎未見(jiàn)凋亡細(xì)胞。蝶骨間軟骨聯(lián)合和蝶枕軟骨聯(lián)合在16d-64d細(xì)胞凋亡有顯著性差異(P<0.05)。 結(jié)論：在大鼠顱底生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中，存在細(xì)胞增殖和凋亡現(xiàn)象并分別與軟骨聯(lián)合增殖區(qū)、肥大區(qū)的生長(zhǎng)變化相一致。細(xì)胞凋亡程度的不同是導(dǎo)致兩軟骨聯(lián)合生長(zhǎng)差異的重要因素。 第三部分 目的：研究大鼠生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中顱底細(xì)胞凋亡信號(hào)傳

6、導(dǎo)途徑，探討軟骨聯(lián)合細(xì)胞凋亡途徑相關(guān)信號(hào)因子：iNOS，F(xiàn)as，Caspase-8,9的分布規(guī)律。 方法：選用出生后4d、8d、16d、32d、48d、64d、128d的清潔級(jí)健康雄性SD大鼠，取顱底軟骨聯(lián)合組織(蝶骨間軟骨聯(lián)合(iss)和蝶枕軟骨聯(lián)合(SOS))。采用免疫組織化學(xué)的方法檢測(cè)大鼠顱底軟骨聯(lián)合細(xì)胞iNOS，F(xiàn)as，Caspase-9，Caspase-8的表達(dá)情況，從而推測(cè)顱底軟骨聯(lián)合細(xì)胞凋亡途徑的時(shí)空特征，和各途徑

7、之間的相關(guān)性。 結(jié)果 iNOS，Caspase-9主要在出生后4d、8d、16d的大鼠顱底軟骨聯(lián)合中間靜止區(qū)、增殖區(qū)表達(dá)。Fas則主要存在于幾乎各個(gè)時(shí)期的軟骨聯(lián)合各層，但以肥大區(qū)，交界區(qū)表達(dá)為多。Caspase-8也主要在肥大區(qū)或交界區(qū)表達(dá)，但僅出現(xiàn)在發(fā)育早期(4d-16d)。蝶骨間軟骨聯(lián)合和蝶枕軟骨聯(lián)合之間沒(méi)有顯著性差異。 結(jié)論顱底軟骨聯(lián)合存在Fas和NO兩種凋亡途徑。Fas途徑發(fā)揮主要作用。NO途徑對(duì)靜止區(qū)和增殖區(qū)的