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文檔簡介
1、研究目的:
觀察基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1(SDF-1)對兔膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞體外增殖的影響,探討SDF-1在軟骨細(xì)胞凋亡過程中的作用。
研究方法:
體外分離培養(yǎng)兔膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞,給予不同濃度(0、1、10、25、50、75、100ng/ml)SDF-1處理24h,同時各濃度組設(shè)立平行對照,采用5μg/mlAMD3100與之共培養(yǎng),采用噻唑藍(lán)(MTT)比色法和測定細(xì)胞周期觀察各組軟骨細(xì)胞增殖。凋亡方面,將軟骨細(xì)胞隨機
2、分為四組:對照組、50ng/mlSDF-1組、50ng/mlSDF-1+5μg/mlAMD3100作用組、5μg/mlAMD3100處理組,將各組置于250μmol/L過氧化氫條件下作用2h,錐蟲藍(lán)染色計數(shù)軟骨細(xì)胞存活率;測定各組中半胱氨酰天冬氨酸特異性蛋白酶(Caspase-3)的活力;流式細(xì)胞儀觀察各組軟骨細(xì)胞凋亡率的變化;原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記法(TUNEL法)檢測凋亡的軟骨細(xì)胞。
結(jié)果:
增殖實驗中50ng/ml
3、SDF-1組吸光度值(0.502±0.017)均高于其它各濃度組,且該組G0/G1期細(xì)胞比例較少,S+(G2/M)期細(xì)胞比例高于其它各組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p﹤0.05);但與AMD3100共培養(yǎng)后,這一差異表現(xiàn)的不明顯。在凋亡方面,錐蟲藍(lán)拒染實驗結(jié)果顯示SDF-1組中細(xì)胞存活率高于其他三組(p<0.01);而SDF-1組膜聯(lián)蛋白Ⅴ-異硫氰酸熒光素(AnnexinV-FITC)標(biāo)記(+)的細(xì)胞比例(4.0±0.92)%低于其他各組(p﹤
4、0.05);SDF-1組Caspase-3活力(40.03±2.56)nmolpNA/(h?mg)蛋白也較其他三組低(p<0.01);TUNEL實驗中SDF-1組細(xì)胞核呈棕黃色的軟骨細(xì)胞數(shù)低于其他各組(p﹤0.05),但各實驗中SDF-1+AMD3100組和AMD3100處理組與對照組比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)。
結(jié)論:
SDF-1在一定濃度范圍內(nèi)可促進(jìn)兔膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞體外增殖,且在50ng/ml時軟骨細(xì)
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