大鼠臍帶間充質(zhì)干細胞對肝細胞增殖、凋亡及功能的影響.pdf

1、目的：
　　探討肝衰竭大鼠血清對臍帶間充質(zhì)干細胞(UMSCs)表面免疫學標記CD86的影響。了解UMSCs對大鼠原代肝細胞增殖、凋亡與功能的影響。
　　方法：
　　采用膠原酶和胰酶兩步法分離UMSCs,采用貼壁法培養(yǎng)、純化;觀察細胞形態(tài)特征及生長狀態(tài);流式細胞儀檢測UMSCs細胞表面分子標記CD90、CD105;將達70％~80％融合的第3代UMSCs隨機分為正常培養(yǎng)基組,正常血清組(含10％正常大鼠血清培養(yǎng)基),肝衰

2、竭血清組(含10％肝衰竭大鼠血清培養(yǎng)基)。以上措施干預培養(yǎng)24 h后用流式細胞儀定量監(jiān)測細胞表面免疫學標記CD86的變化。用膠原酶灌注法分離大鼠肝細胞,肝細胞與UMSCs應用Transwell共培養(yǎng)。原代大鼠肝細胞分為三組:UMSCs組、大鼠原代肝細胞組及UMSCs與大鼠原代肝細胞共培養(yǎng)組,分別于共培養(yǎng)第1d、3d、5d、7d通過MTT法檢測各組細胞增殖能力;UMSCs與肝細胞共培養(yǎng)組、肝細胞組,采用脂多糖(LPS)誘導肝細胞凋亡,于共

3、培養(yǎng)24h后采用流式細胞儀檢測細胞凋亡率;收集各組細胞共培養(yǎng)第1d、3d、5d培養(yǎng)上清液,ELISA法檢測上清液中白蛋白含量。
　　結(jié)果：
　　1.采用膠原酶和胰酶兩步酶法能獲得大量的單個UMSCs,在體外可以穩(wěn)定的生長、擴增。流式細胞儀檢測結(jié)果顯示,分離得到的細胞穩(wěn)定表達相關(guān)抗原標記CD90、CD105,表達率為99.7％、99.5％。2.不同組誘導培養(yǎng)UMSCs24小時后,正常培養(yǎng)基組、正常血清組,肝衰竭血清組細胞表面C

4、D86表達率為0.5％,0.6％,0.4％。相比差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。3.(1)UMSCs與原代大鼠肝細胞共培養(yǎng)組在第1d、3d、5d、7d的OD值大于相應時間點的UMSCs組OD值與原代大鼠肝細胞組OD值之和(P<0.05)。(2)誘導肝細胞凋亡后,流式細胞儀檢測陽性對照組、陰性對照組及UMSCs密度為1*104/ml、1*106/ml與肝細胞共培養(yǎng)組凋亡率分別為93.3％、54.2％、59.7％、72.9％,相比差異有統(tǒng)

5、計學意義(P<0.05)。(3)UMSCs無白蛋白分泌能力, UMSCs與大鼠原代肝細胞共培養(yǎng)組培養(yǎng)上清液中白蛋白水平第1d、3d、5d均較原代大鼠肝細胞組明顯升高(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　膠原酶和胰酶兩步消化法是一種簡單、可靠的分離UMSCs的方法;大鼠UMSCs穩(wěn)定表達相關(guān)抗原標記CD90、CD105。經(jīng)肝衰竭大鼠血清干預培養(yǎng)UMSCs后CD86仍不表達。UMSCs在體外可以促進肝細胞增殖,抑制其凋亡,并具有增