成年大鼠嗅鞘細(xì)胞的純化培養(yǎng)及其增殖劑的研究.pdf

1、目的： ①運用改良差速貼壁法+無血清條件培養(yǎng)液來純化培養(yǎng)嗅鞘細(xì)胞，以期建立一種新穎、經(jīng)濟、簡單、實用的純化培養(yǎng)成年大鼠嗅鞘細(xì)胞的方法。 ②全面探討有血清條件培養(yǎng)液、Forskolin與堿性成纖維生長因子(bFGF)對嗅鞘細(xì)胞生長增殖的影響，以及多種增殖劑聯(lián)合干預(yù)嗅鞘細(xì)胞的效果，以期解決基礎(chǔ)與臨床研究中嗅鞘細(xì)胞數(shù)量及來源有限的問題。 方法： ①將無菌條件下取材、消化的嗅鞘單細(xì)胞混懸液分為三份：單純改良差速貼

2、壁組、單純無血清條件培養(yǎng)液純化組和改良差速貼壁+無血清條件培養(yǎng)液純化組。各組按要求分別行12 h+24 h差速貼壁純化和預(yù)先制備的含同源嗅鞘培養(yǎng)上清液的無血清條件培養(yǎng)液孵育純化36～48 h，運用倒置顯微鏡觀察和細(xì)胞免疫熒光染色法評估和檢測各組嗅鞘細(xì)胞的活力和純度。 ②純化的嗅鞘細(xì)胞按照隨機化原則分為六組：空白對照組、有血清條件培養(yǎng)液組、Forskolin組、bFGF組、Forskolin+bFGF組和三聯(lián)合干預(yù)組。應(yīng)用BrdU

3、(5-bromodeoxyuridine)摻入法和MTT活性檢測法全面評估各增殖劑及其聯(lián)合試劑對嗅鞘細(xì)胞生長增殖的影響效果。 結(jié)果： ①改良差速貼壁+無血清條件培養(yǎng)液可以使原代培養(yǎng)的嗅鞘細(xì)胞純度達(dá)到88％～92％，明顯優(yōu)于其它兩組純化對照組。 ②有血清條件培養(yǎng)液、Forskolin較空白對照組可以促進(jìn)嗅鞘細(xì)胞的活性(P<0.05)，其增值效應(yīng)相對緩和。bFGF對嗅鞘細(xì)胞的增殖效果比較強烈，較空白對照組可以明顯促進(jìn)

4、嗅鞘細(xì)胞活性(P<0.001)。此外，F(xiàn)orskolin+bFGF和有血清條件培養(yǎng)液+Forskolin+bFGF聯(lián)合干預(yù)組均可大幅度地提高嗅鞘細(xì)胞的數(shù)量(P<0.001)，三種增殖劑組合應(yīng)用有明顯的疊加效果。 結(jié)論： ①運用改良差速貼壁法+無血清條件培養(yǎng)液法可以建立起完善的成年大鼠嗅鞘細(xì)胞培養(yǎng)純化新理論。 ②有血清條件培養(yǎng)液、Forskolin與bFGF對嗅鞘細(xì)胞均有增殖效應(yīng)。三種干預(yù)因素的聯(lián)合作用可以大幅度的