Compound 48-80對(duì)apoE基因敲除小鼠頸總動(dòng)脈套環(huán)誘導(dǎo)斑塊的影響.pdf

1、目的:肥大細(xì)胞與動(dòng)脈粥樣硬化的關(guān)系研究目前主要是病理學(xué)觀察和細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)。本課題擬采用肥大細(xì)胞脫顆粒劑Compound48/80作用于頸總動(dòng)脈套環(huán)的apoE基因敲除(apoE-/-)小鼠，以在動(dòng)物學(xué)實(shí)驗(yàn)水平探討肥大細(xì)胞脫顆粒對(duì)斑塊的影響及其可能機(jī)制。方法:40只10周齡apoE-/-小鼠給予高脂高膽固醇飼料飼養(yǎng)，2周后行右頸總動(dòng)脈套環(huán)術(shù)。采用戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，取頸正中切口，剝離雙側(cè)頸總動(dòng)脈，在右頸總動(dòng)脈套上內(nèi)徑0.3mm、長1.0c

2、m的硅膠管，并用三根絲線束緊硅膠管，導(dǎo)致管腔狹窄，術(shù)畢，縫合傷口，放置籠中。術(shù)后4周，隨機(jī)分為2組，每組20只，實(shí)驗(yàn)組小鼠腹腔注射Compound48/80(0.5mg/kg)，對(duì)照組小鼠腹腔注射相同體積的D-hank's，隔日一次，共4次。第4次注射后30min，安樂死處死動(dòng)物，摘眼球取血，分離血清，采用酶法測(cè)定血清脂質(zhì)含量，采用比色法測(cè)定血清類胰蛋白酶活性。小鼠原位灌流固定，取雙側(cè)頸總動(dòng)脈置10％中性緩沖福爾馬林中固定，石蠟包埋，連

3、續(xù)切片，HE染色。套環(huán)側(cè)頸總動(dòng)脈石蠟切片進(jìn)行甲苯胺藍(lán)染色，a-smoothmuscleactin、Mac3、IL-1β、vWF、VE-cadherin免疫組織化學(xué)染色，bFGF原位雜交、免疫熒光染色。HMIAS2000高清晰度彩色醫(yī)學(xué)圖文分析系統(tǒng)進(jìn)行圖象分析，比較兩組套環(huán)側(cè)頸總動(dòng)脈斑塊最大橫截面積、頸總動(dòng)脈最大狹窄程度(內(nèi)膜面積/管腔面積)、頸總動(dòng)脈外膜脫顆粒的肥大細(xì)胞百分率、斑塊內(nèi)新生血管密度、斑塊內(nèi)出血例數(shù)；比較兩組套環(huán)側(cè)頸總動(dòng)脈斑

4、塊內(nèi)a-smoothmuscleactin、Mac3、IL-1β、VE-cadherin、bFGF表達(dá)的差異。結(jié)果:實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組未套環(huán)側(cè)頸總動(dòng)脈均無明顯病理改變(斑塊面積均為0)，而兩組套環(huán)側(cè)頸總動(dòng)脈均有斑塊形成，Compound48/80明顯增大套環(huán)側(cè)頸總動(dòng)脈斑塊最大橫截面積(5.85±0.75x104μm2VS0.86±0.28x104μm2，P＜0.05)、頸總動(dòng)脈最大狹窄程度(81±15％VS41±12％，P＜0.05)。Co

5、mpound48/80增加套環(huán)側(cè)頸總動(dòng)脈外膜脫顆粒的肥大細(xì)胞百分率(80.6±17.8％VS13.5±4.1％，P＜0.05)、血清類胰蛋白酶活性(0.57±0.13u/LVS0.36±0.10u/L，P＜0.05)：促進(jìn)套環(huán)側(cè)頸總動(dòng)脈斑塊內(nèi)a-smoothmuscleactin、Mac3、IL-1β、VE-cadherin、bFGF的表達(dá)，并使斑塊內(nèi)新生血管密度及斑塊內(nèi)出血例數(shù)增加。結(jié)論:1.套環(huán)能加速apoE基因敲除小鼠頸總動(dòng)脈斑塊