抗草甘膦大豆轉(zhuǎn)基因PCR檢測及其飼用安全研究.pdf

1、該論文研究了RR抗草甘膦轉(zhuǎn)基因大豆、豆粕及其飼料產(chǎn)品中外源基因的PCR檢測技術(shù)以及系統(tǒng)評(píng)價(jià)其飼喂動(dòng)物的安全性.建立大豆及其飼料產(chǎn)品中轉(zhuǎn)基因成分的定性和定量PCR檢測方法.以CTAB和GMO試劑盒兩種方法提取基因組DNA.用常規(guī)定性PCR對(duì)外源基因盒結(jié)構(gòu)中的不同基因進(jìn)行篩選或特異性擴(kuò)增,對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行回收和酶切鑒定,最低檢測下限為0.1﹪;在巢式PCR方法中,對(duì)大豆模板DNA的檢測下限可達(dá)到pg級(jí)水平;利用建立的雙引物PCR技術(shù)同時(shí)檢測內(nèi)源和

2、外源基因,檢出來自美國、阿根廷的大豆及飼料為轉(zhuǎn)基因陽性產(chǎn)品,取得良好效果.另外,建立了雙鏈DNA SYBR Green I結(jié)合染料實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),繪制lec和CaMV35s基因定量擴(kuò)增標(biāo)準(zhǔn)曲線方程,R<'2>值分別達(dá)到0.9997和0.9992;對(duì)已知轉(zhuǎn)基因含量的大豆標(biāo)準(zhǔn)品及大豆模擬樣品進(jìn)行定量,實(shí)測值與實(shí)際值相對(duì)偏差在5~11﹪范圍之內(nèi).上述PCR方法適用于RR大豆或飼料中轉(zhuǎn)基因成分的定性與定量檢測.通過斷奶仔豬生長試驗(yàn)、生長

3、豬消化試驗(yàn)和大鼠亞慢性毒性試驗(yàn),評(píng)價(jià)RR抗草甘膦轉(zhuǎn)基因豆粕的飼用價(jià)值和安全性.RR大豆(粕)的常規(guī)概略養(yǎng)分、氨基酸組成、微量元素、脂肪酸組成及胰蛋白酶抑制因子等抗?fàn)I養(yǎng)因子含量在正常范圍值內(nèi),RR豆粕對(duì)斷奶仔豬的生產(chǎn)性能和血生理生化無明顯影響.生長豬回腸末端安裝T型瘺管試驗(yàn)顯示,RR轉(zhuǎn)基因豆粕粗蛋白質(zhì)、氨基酸的回腸表觀消化率及回腸真消化率與常規(guī)豆粕相近;外源cp4 epsps基因在生長豬肝臟、肌肉、脾臟和胸腺組織中未被檢出,在食糜和糞便中

4、的檢出率均僅為6.7﹪.在80只Sprague-Dawley大鼠13wks的亞慢性安全性試驗(yàn)中,飼喂60﹪常規(guī)非轉(zhuǎn)基因或RR轉(zhuǎn)基因豆粕日糧的大鼠生長與采食無顯著性差異(P>0.05);飼喂90﹪高含量RR豆粕的大鼠血液學(xué)、血清生化和尿液參數(shù)在生理值范圍內(nèi);試驗(yàn)期內(nèi)無大鼠死亡,大體剖檢和組織病理學(xué)檢驗(yàn)并未發(fā)現(xiàn)體組織有病理學(xué)變化特征;另外,在大鼠咬肌組織未發(fā)現(xiàn)有外源或內(nèi)源DNA殘留.常規(guī)與RR抗草甘膦轉(zhuǎn)基因大豆(粕)營養(yǎng)組成具有等價(jià)性,對(duì)斷