抗草甘膦轉(zhuǎn)基因玉米以及煙草的研究.pdf

1、草甘膦作為一種廣譜、低毒、有效的有機(jī)磷類除草劑對一年、多年生植物具有較強(qiáng)的除殺能力，成為除草劑中的重要品種，被人們廣泛使用。但噴施除草劑草甘膦在殺死雜草的同時(shí)也將農(nóng)作物非選擇性的除殺，給農(nóng)民造成了不必要的損失。利用基因工程方法培育抗除草劑轉(zhuǎn)基因作物成為最方便最根本地防治雜草的方法。 本實(shí)驗(yàn)利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法，將除草劑草甘膦抗性基因aroA導(dǎo)入到玉米自交系綜31，經(jīng)培養(yǎng)基除草劑梯度篩選，獲得33株再生苗。提取33棵的TO代轉(zhuǎn)基因

2、植株的葉片DNA，分別用目的基因和篩選基因的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，獲得10株陽性植株?，F(xiàn)已收獲T1代轉(zhuǎn)基因玉米籽粒。 實(shí)驗(yàn)中構(gòu)建兩個(gè)煙草轉(zhuǎn)化載體：含有信號肽的轉(zhuǎn)基因載體和非含信號肽的轉(zhuǎn)基因載體，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法，將抗除草劑草甘膦基因aroA導(dǎo)入到煙草中，經(jīng)除草劑篩選培養(yǎng)得到再生苗。通過PCR鑒定，含有信號肽以及非信號肽轉(zhuǎn)基因煙草共獲得23株、16株陽性株。從以上含有以及不含有信號肽的轉(zhuǎn)基因煙草中各選取6株(SP10、SP18、

3、SP19、SP24、SP25、SP44)、4株(9-2、22-3、37-3、55-2)健壯陽性株提取基因組RNA進(jìn)行RT-PCR檢測，由RT-PCR結(jié)果可以看出，所選取得轉(zhuǎn)基因煙草均擴(kuò)出目的基因，說明目的基因已轉(zhuǎn)入到煙草中。而且各株系的目的基因表達(dá)量不同(9-2、55-2、SP10、SP19、SP24、SP44的表達(dá)量較高，而22-3、37-3、SP18、SP25表達(dá)量比較低，野生型沒有表達(dá))。 實(shí)驗(yàn)中還對轉(zhuǎn)基因煙草以及野生型煙

4、草的草甘膦抗性進(jìn)行了比較。分別在3-4葉期噴施1.65g/L草甘膦以及在6-7葉期噴施2.15g/L草甘膦，三周后觀察。結(jié)果表明，轉(zhuǎn)基因煙草表現(xiàn)出較野生型煙草更高的抗性。除此之外，含有信號肽的轉(zhuǎn)基因煙草的草甘膦抗性比非含信號肽載體的轉(zhuǎn)基因煙草高。而且非含信號肽載體的轉(zhuǎn)基因煙草也表現(xiàn)出比野生型較高的抗性，這是因?yàn)榉呛盘栯妮d體的轉(zhuǎn)基因煙草雖然不含有葉綠體定位信號肽，但可產(chǎn)生胞質(zhì)型EPSP合酶，可能有一定的EPSP合酶可通過一定的通道進(jìn)入到