抗草甘膦aroAM1基因轉(zhuǎn)化煙草的研究.pdf

1、草甘膦是70年代開發(fā)的世界上最為成功的一種除草劑。由于具有廣譜性，對(duì)環(huán)境無污染，對(duì)人和動(dòng)物的健康幾乎不影響，能除掉其他除草劑難以鏟除的多種多年生植物等優(yōu)點(diǎn)，這種除草劑被廣泛使用。 近年來，抗草甘膦轉(zhuǎn)基因作物的研究進(jìn)展迅速。從1996年美國種植抗草甘膦轉(zhuǎn)基因大豆開始，全球轉(zhuǎn)基因作物的數(shù)量在逐年增加，然而這些品種幾乎都是孟山都公司的專利，因此開發(fā)自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的、商業(yè)化的抗草甘膦作物，成為當(dāng)前國內(nèi)研究的重點(diǎn)。 5.烯醇式丙酮酸

2、-3-磷酸莽草酸合成酶(EPSPS)是草甘膦作用機(jī)理中的關(guān)鍵酶之一，它由aroA基因所編碼。 本實(shí)驗(yàn)所用基因?yàn)樯抽T氏菌(Salmonella typhimurium)和大腸桿菌(Escherichia coli)中aroA基因的重組基因aroAM1。 本實(shí)驗(yàn)通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法[1]，用農(nóng)桿菌感染受傷的煙草葉片細(xì)胞，使外源基因aroAM1轉(zhuǎn)化到煙草基因組中。 最后，利用組織培養(yǎng)技術(shù)，再生出轉(zhuǎn)基因煙草植株。 獲

3、得轉(zhuǎn)aroAM1基因的農(nóng)桿菌后，在優(yōu)化的含有0.1μg/ml IAA，2μg/ml6-BA，500μg/ml CB，24μmol/L草甘膦的培養(yǎng)基上培養(yǎng)煙草葉片，獲得再生煙草植株。 然后在三個(gè)不同水平上對(duì)再生煙草植株進(jìn)行檢測(cè)：在分子水平上，PCR檢測(cè)陽性率為100％；在器官水平上，轉(zhuǎn)基因的離體煙草葉片對(duì)草甘膦的抗性增加了12倍；在植株水平上，用5mmol/L草甘膦涂抹非轉(zhuǎn)基因煙草和轉(zhuǎn)基因煙草葉片，前者葉片枯黃，而后者變化不明顯。