高遷移率族蛋白B1對(duì)早期結(jié)直腸腫瘤VEGF-A表達(dá)和毛細(xì)血管生成的影響.pdf

1、背景：高遷移率組蛋白B1（HMGB1）分泌到胞外作為一種晚期炎癥介質(zhì)，不僅可參與多種炎癥的發(fā)生，而且還在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起重要作用，可能涉及細(xì)胞凋亡、免疫逃逸及淋巴轉(zhuǎn)移。最近研究發(fā)現(xiàn)HMGB1在體外可能促進(jìn)毛細(xì)血管形成過(guò)程。本課題對(duì)其在早期結(jié)直腸腫瘤毛細(xì)血管生成及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF-A）中的作用進(jìn)行深入研究，以期為結(jié)直腸腺瘤向早癌轉(zhuǎn)化機(jī)制提供新的視角及理論依據(jù)。
　　第一部分結(jié)直腸早期腫瘤HMGB1及VEGF-A的表達(dá)

2、和對(duì)毛細(xì)血管生成的作用
　　目的：探討HMGB1對(duì)早期結(jié)直腸腫瘤組織VEGF-A表達(dá)及毛細(xì)血管生成的影響。方法：根據(jù)Sano分型在窄帶顯像技術(shù)（NBI）下將早期結(jié)直腸腫瘤分為CP-I、II、IIIA及IIIB組，并設(shè)健康對(duì)照組（NC）；應(yīng)用蛋白印跡及免疫組織化方法檢測(cè)各組HMGB1及VEGF-A的表達(dá)，并分析其相關(guān)性。結(jié)果：免疫組化方法表明HMGB1及VEGF-A在NC、CP-I、II、IIIA及IIIB組的陽(yáng)性表達(dá)率分別為44.

3、0％、53.6%、75.7%、85.0%、88.8%和12.0%、21.4%、53.6%、70.0%、88.8%，各組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。IIIA和IIIB組HMGB1的高表達(dá)率均為60.0%及72.2%；VEGF-A的高表達(dá)率分別為60.0%及61.1%，明顯高于對(duì)照組（P<0.01）。早期結(jié)直腸腫瘤中HMGB1的表達(dá)與VEGF-A表達(dá)之間呈正相關(guān)（rs=0.524，P<0.05）。蛋白印跡學(xué)檢查與上述結(jié)果一致。結(jié)論：

4、HMGB1在結(jié)直腸早期腫瘤組織中表達(dá)上調(diào)，可能具有促毛細(xì)血管生成的作用，而這種作用可能通過(guò)上調(diào)VEGF-A表達(dá)實(shí)現(xiàn)。
　　第二部分HMGB1及其受體對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞VEGF-A表達(dá)的調(diào)控
　　目的：探討HMGB1及其受體RAGE、TLR2及TLR4對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞VEGF-A表達(dá)的調(diào)控。方法：用不同濃度、不同持續(xù)時(shí)間的HMGB1蛋白刺激人內(nèi)皮細(xì)胞，采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（Real-time PCR）聯(lián)合酶聯(lián)免疫吸附

5、試驗(yàn)（ELISA）分別從基因及蛋白水平觀察VEGF-A表達(dá)的變化；應(yīng)用特異性小干擾RNA分別抑制HMGB1及其受體RAGE、TLR2及TLR4表達(dá)后，觀察VEGF-A表達(dá)的變化。結(jié)果：HMGB1蛋白對(duì)人內(nèi)皮細(xì)胞VEGF-A mRNA和蛋白表達(dá)具有促進(jìn)作用，且呈濃度及時(shí)間依賴(lài)性；抑制HMGB1及RAGE表達(dá)后內(nèi)皮細(xì)胞VEGF-A的表達(dá)水平明顯低于對(duì)照組（P<0.05）；抑制TLR2及TLR4表達(dá)后VEGF-A的表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組（P<