wt-p53、B7-1、GM-CSF基因轉(zhuǎn)染對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞增殖、凋亡和免疫原性的影響.pdf

1、實(shí)驗(yàn)背景和目的: 神經(jīng)母細(xì)胞瘤是兒童和嬰兒最常見(jiàn)的實(shí)體腫瘤之一，惡性度極高，傳統(tǒng)治療效果不理想。近年來(lái)基因治療的開(kāi)展，為神經(jīng)母細(xì)胞瘤的治療帶來(lái)了新的希望。 腫瘤的發(fā)生和發(fā)展往往涉及多種基因的異常，單靠導(dǎo)入一種基因很難達(dá)到廣泛而有效的治療效果。因此，腫瘤的復(fù)合基因治療較單基因治療更為合理。 抑癌基因的突變和免疫逃逸是腫瘤發(fā)生和發(fā)展的兩個(gè)主要原因。研究表明，神經(jīng)母細(xì)胞瘤是弱免疫原性腫瘤，而且存在于SH-SY5Y細(xì)胞內(nèi)

2、的wt-53基因處在失活狀態(tài)。據(jù)此，以重組腺病毒載體攜帶腫瘤抑制基因wt-p53和免疫相關(guān)基因B7-1、GM-CSF，轉(zhuǎn)染神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y細(xì)胞株，觀察對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖、凋亡及免疫原性的影響，為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 實(shí)驗(yàn)方法: 以攜帶綠色熒光蛋白的腺病毒(Ad-GFP)轉(zhuǎn)染SH-SY5Y細(xì)胞，通過(guò)流式細(xì)胞儀(FCM)判斷轉(zhuǎn)染效率，確定合適的感染倍數(shù)(MOI)。分別以空病毒質(zhì)粒、攜帶野生型p53基因(wt-p53)

3、的腺病毒質(zhì)粒(Ad-p53)及攜帶wt-p53、B7-1和GM-CSF基因的腺病毒質(zhì)粒(BB-102)轉(zhuǎn)染SH-SY5Y細(xì)胞，依次分為SH/Ad組、SH/p53組、SH/BB-102組，并以未轉(zhuǎn)染任何腺病毒質(zhì)粒的腫瘤細(xì)胞為空白對(duì)照組(SH組)。分別采用Western blot、FCM和ELISA方法檢測(cè)各組轉(zhuǎn)染后，p53蛋白、B7-1分子和GM-CSF的表達(dá)水平。觀察轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞生長(zhǎng)情況，繪制生長(zhǎng)曲線，通過(guò)FCM分析細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡情

4、況。用混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)法檢測(cè)瘤苗對(duì)T淋巴細(xì)胞增殖和細(xì)胞因子分泌的誘導(dǎo)作用。所有數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS12.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果: FCM檢測(cè)表明腺病毒對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞有較高的轉(zhuǎn)染率，100MOI為合適的轉(zhuǎn)染倍數(shù)。BB-102轉(zhuǎn)染SH-SY5Y細(xì)胞后，p53、B7-1和GM-CSF基因都得到了高效表達(dá)。與SH組和SH/Ad組相比，SH/p53組和SH/BB-102組細(xì)胞生長(zhǎng)曲線上升減緩，生長(zhǎng)速度減慢，細(xì)胞凋亡增

5、加，G1期細(xì)胞比例增加。SH/BB-102組與其他組比較，能夠促進(jìn)T淋巴細(xì)胞增殖，增加IFN-γ和IL-2的分泌。 結(jié)論： 1、重組腺病毒載體能夠有效地將wt-p53、B7-1、GM-CSF基因?qū)肷窠?jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y細(xì)胞株，并使其在細(xì)胞中高效表達(dá)。 2、wt-p53基因能夠有效地抑制SH-SY5Y細(xì)胞的生長(zhǎng)，調(diào)控細(xì)胞周期，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。 3、B7-1和GM-CSF基因具有協(xié)同作用，可以促進(jìn)T淋