溴苯腈對SH-SY5Y細胞毒性及NF-κB、MAPKs通路的影響.pdf

1、第一部分溴苯腈對SH-SY5Y細胞增殖與凋亡的影響
　　目的:探討溴苯腈對SH-SY5Y細胞增殖、凋亡的影響
　　方法:用噻唑藍(MTT)法檢測溴苯腈細胞毒性,根據(jù)細胞存活率篩選合適劑量濃度;以選定的溴苯腈劑量組,處理時間為24h,倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)及數(shù)目變化;用Hoechst33342/PI雙染法和流式細胞術檢測溴苯腈對細胞凋亡形態(tài)及凋亡率的影響;用噻唑藍(MTT)法檢測溴苯腈分別處理24h和48h后對細胞抑制率及I

2、C50的影響,用細胞計數(shù)法測定溴苯腈對SH-SY5Y細胞生長曲線及倍增時間的影響。
　　結果:MTT法測定細胞存活率篩選的合適劑量濃度為0、10、50、100μmol/L。按確定的劑量組處理SH-SY5Y細胞24h,在倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)發(fā)現(xiàn),陰性對照組細胞呈多角形,胞體大,排列緊密,縫隙小;高劑量組細胞呈長梭形狀改變,胞體變小,稀疏。溴苯腈對細胞凋亡形態(tài)及凋亡率的影響:陰性對照組細胞核染成淡藍色,形態(tài)飽滿,核膜完整,核質著色

3、深,密度均勻一致;10、50μmol/L處理組與陰性對照組比較未見異常;100μmol/L可見少量核皺縮變小,染色質濃縮邊集,核形態(tài)多樣,熒光增強,可見少量形似塊狀的凋亡細胞碎片的特征。與陰性對照組比較,各劑量組溴苯腈對SH-SY5Y細胞早期和晚期凋亡率均無明顯影響,差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。檢測細胞增殖活力發(fā)現(xiàn),與陰性對照組比較,染毒24h和48h后,50、100μmol/L溴苯腈組的細胞增殖抑制率均增加,差異有統(tǒng)計學意義(

4、P<0.05);與24h各組比,處理48h后50、100μmol/L組的細胞增殖抑制率顯著增加,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。不同濃度溴苯腈處理SH-SY5Y細胞24h和48h后,其IC50分別是267.00±29.54μmol/L,95％CI(193.06~340.40μmol/L)和54.33±8.08μmol/L,95%CI(34.25~74.41μmol/L),IC50隨著時間的延長而減小,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

5、生長曲線實驗結果顯示,隨著染毒劑量的增加,細胞數(shù)目開始增加的時間后延,細胞倍增時間增加,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05);100μmol/L組在0~96h生長曲線中細胞數(shù)目無明顯變化(P>0.05);各組細胞數(shù)目在溴苯腈處理24h開始出現(xiàn)差異,組間差異隨著培養(yǎng)時間延長更加明顯,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　結論:在本實驗條件下,根據(jù)細胞數(shù)目形態(tài)、增殖抑制率、生長曲線結果均提示,溴苯腈可抑制SH-SY5Y細胞的增殖;細胞

6、凋亡形態(tài)及凋亡率未觀察到明顯變化。
　　第二部分NF-κB、MAPKs等在溴苯腈致SH-SY5Y細胞增殖抑制中表達及作用初探
　　目的:探討溴苯腈作用SH-SY5Y細胞后對NF-κB、MAPKs通路的影響。
　　方法:以0、10、50、100μmol/L溴苯腈分別處理SH-SY5Y細胞24h,蛋白免疫印跡法(Western blot)檢測NF-κB、IκBα、Bcl-2、XIAP、p-p38、p-JNK的表達;免疫細胞

7、化學法(immunocytochemistry)檢測NF-κB、Cytc-c的表達。
　　結果:溴苯腈處理SH-SY5Y細胞24h,與陰性對照組比較,隨著染毒劑量的增加,NF-κB、p-p38、Cytc-c表達增加,IκBα、Bcl-2表達降低,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05);XIAP、p-JNK表達與陰性對照組比較,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　結論:在本實驗條件下,觀察到溴苯腈處理后,有NF-κB、p38的