線粒體在PBDE-47致SH-SY5Y細胞凋亡中的作用.pdf

1、多溴聯(lián)苯醚(Polybrominated diphenyl ethers,PBDEs)的神經(jīng)毒性作用近年來受到人們的廣泛關注,但其具體機制還不十分清楚。本實驗通過PBDE-47作用于人神經(jīng)母細胞瘤細胞(SH-SY5Y細胞),觀察其對細胞凋亡率、線粒體膜電位(ΔΨm)、線粒體Ca2+濃度([Ca2+]m)以及細胞色素C的影響,探討線粒體在PBDE-47致SH-SY5Y細胞凋亡中的作用,為PBDEs的神經(jīng)毒性作用機制研究提供理論依據(jù)。

2、>　　第一部分PBDE-47對SH-SY5Y細胞凋亡率、線粒體膜電位和線粒體Ca2+濃度的影響
　　目的:研究不同劑量PBDE-47對體外培養(yǎng)的SH-SY5Y細胞凋亡率、線粒體膜電位和線粒體Ca2+濃度的影響。
　　方法:利用線粒體膜電位(JC-1)和線粒體鈣離子(Rhod-2/AM)檢測熒光探針處理細胞,分別采用流式細胞術(Flow cytometry,FCM)和熒光酶標儀檢測PBDE-47作用對SH-SY5Y細胞凋亡率、

3、ΔΨm和[Ca2+]m的影響。
　　結果:與溶劑對照組比較,10μmol/L PBDE-47染毒組的細胞早期凋亡率、總凋亡率明顯升高(P<0.05);10μmol/L PBDE-47染毒組ΔΨm和[Ca2+]m顯著下降(P<0.05)。
　　結論:PBDE-47導致ΔΨm和[Ca2+]m下降,可能與其誘導細胞凋亡相關。
　　第二部分PBDE-47對SH-SY5Y細胞內(nèi)細胞色素C mRNA和蛋白表達的影響
　　目的

4、:探討PBDE-47對細胞色素C mRNA和蛋白表達水平的影響。
　　方法:提取胞漿RNA利用逆轉(zhuǎn)錄PCR法檢測胞漿細胞色素C的mRNA表達水平;分離、提取蛋白后利用Western blot技術檢測細胞胞漿和線粒體細胞色素C的蛋白表達水平。
　　結果:與溶劑對照組相比,10μmol/L PBDE-47染毒組胞漿細胞色素C mRNA表達水平明顯升高(P<0.05);1、5、10μmol/LPBDE-47染毒組的線粒體細胞色素C