HIF-1α在喹啉酸誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞和Sh-SY5Y細(xì)胞損傷中的作用.pdf

1、目的:探討低氧誘導(dǎo)因子-1(hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α)在喹啉酸誘導(dǎo)大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤PC12細(xì)胞和人神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y細(xì)胞損傷的作用及其激活與Akt/GSK-3β/β-Catenin信號(hào)通路的關(guān)系。
　　方法:將體外培養(yǎng)的PC12和SH-SY5Y細(xì)胞經(jīng)不同濃度喹啉酸處理不同時(shí)間后，分別篩選出喹啉酸誘導(dǎo)細(xì)胞損傷的低、中、高劑量及其作用時(shí)間，然后將實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照組、喹啉酸低、中、高劑

2、量組及HIF-1α抑制劑(2ME2)預(yù)處理?yè)p傷模型組，分別作用細(xì)胞24 h后，采用噻唑藍(lán)還原法和乳酸脫氫酶漏出率檢測(cè)法測(cè)定細(xì)胞損傷程度，采用丙二醛和超氧化物歧化酶試劑盒檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)氧自由基水平，倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，Hoechst33342單熒光染色法觀察細(xì)胞凋亡，免疫熒光染色法檢測(cè)HIF-1α在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)，免疫印跡法檢測(cè)細(xì)胞HIF-1α、β-鏈蛋白(β-Catenin)、糖原合成激酶-3β(Glycogen synthas

3、e kinase3β，GSK-3β)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(phosphorylated-Akt，p-Akt)、淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/lewkmia-2，Bcl-2)和Bcl-2相關(guān)X蛋白(Bcl-2Associated X Protein，Bax)的表達(dá)。
　　結(jié)果:喹啉酸可呈劑量、時(shí)間依賴性地誘導(dǎo)PC12和SH-SY5Y細(xì)胞損傷，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)氧自由基增多和細(xì)胞凋亡，同時(shí)引起細(xì)胞皺縮，軸

4、突變短。此外，喹啉酸可使PC12和SH-SY5Y細(xì)胞HIF-1α表達(dá)上調(diào)并聚集發(fā)生核轉(zhuǎn)位;β-Catenin表達(dá)明顯降低，GSK-3β和p-Akt表達(dá)明顯增高，Bax/Bcl-2表達(dá)比例顯著增加;而HIF-1α抑制劑2ME2可降低喹啉酸誘導(dǎo)的PC12和SH-SY5Y細(xì)胞損傷，同時(shí)上調(diào)β-Catenin的表達(dá)及降低HIF-1α、GSK-3β、p-Akt和Bax/Bcl-2的表達(dá)。
　　結(jié)論:喹啉酸誘導(dǎo)PC12和SH-SY5Y細(xì)胞損傷