Cathepsin L在rotenone誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞周期紊亂中的作用.pdf

1、目的:研究溶酶體組織蛋白酶L(Cathepsin L)與細(xì)胞周期異常在魚藤酮(rotenone)誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞死亡中的作用，初步探討Cathepsin L與細(xì)胞周期的關(guān)系及其在帕金森病發(fā)病中的機制。
　　 方法:采用rotenone處理入神經(jīng)母細(xì)胞瘤株SH-SY5Y細(xì)胞。處理組在rotenone給藥前加入選擇性Cathepsin L抑制劑Z-FY-DMK(10μM)。WST-I法檢測細(xì)胞活性:Hoechst33258染

2、色法觀察細(xì)胞核形態(tài)變化；流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期的改變；免疫組化、Westem blot法觀察Cathepsin L及相應(yīng)的細(xì)胞周期蛋白在rotenone誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞死亡中的分子機制。
　　 結(jié)果:WST-1的結(jié)果表明，Z-FY-DMK對rotenone處理的SH-SYSY細(xì)胞具有保護(hù)作用。形態(tài)學(xué)檢測和細(xì)胞周期檢測顯示rotenone誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，而Z-FY-DMK能減少細(xì)胞凋亡的數(shù)量。流式細(xì)胞儀檢測發(fā)現(xiàn)rotenon

3、e誘導(dǎo)的細(xì)胞出現(xiàn)G2/M期、S期阻滯，而Z-FY-DMK能減少S期的阻滯并減少凋亡峰。免疫組化和Western Blot的結(jié)果顯示，rotenone能增加Cathepsin L的表達(dá)，并使CathepsinL從溶酶體釋放到細(xì)胞質(zhì)，隨著rotenone作用時間的延長，還有少部分CathepsinL進(jìn)入細(xì)胞核；而Z-FY-DMK能減少Cathepsin L的表達(dá)并抑制其入核。細(xì)胞周期蛋白eyclin B1、cyclin A也發(fā)生了周期性的變

4、化:rotenone能減少胞漿cyclin A的表達(dá)；而Z-FY-DMK能增加其表達(dá)。
　　 結(jié)論:本實驗研究表明:Cathepsin L的表達(dá)和細(xì)胞周期紊亂參與了rotenone誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞的死亡。1、rotenone通過誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞Cathepsin L的表達(dá)和核轉(zhuǎn)位，影響細(xì)胞周期，使細(xì)胞發(fā)生S期阻滯，從而擾亂了細(xì)胞周期，并啟動凋亡程序發(fā)生凋亡；2、Cathepsin L的抑制劑Z-FY-DMK通過抑制