自噬在魚藤酮損傷SH-SY5Y細(xì)胞中對(duì)α-synuclein和HDAC6的作用.pdf

1、目的：研究自噬在魚藤酮(Rotenone)誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞損傷中的作用，初步探討自噬、α-synuclein以及組蛋白脫乙?；?histone deactylase6，HDAC6)三者之間的關(guān)系及在帕金森發(fā)病(Parkinson's disease，PD)中的作用機(jī)制。
　　 方法：采用Rotenone處理人神經(jīng)母細(xì)胞瘤株SH-SY5Y細(xì)胞建立PD細(xì)胞模型，WST-1法測(cè)定Rotenone對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞增殖活性的

2、抑制作用；免疫熒光和Westernblot檢測(cè)SH-SY5Y細(xì)胞中自噬相關(guān)蛋白LC3以及α-synuclein、HDAC6的表達(dá)情況。運(yùn)用免疫熒光和Western blot檢測(cè)自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤(3-MA)和激活劑雷帕霉素(Rapamycin)對(duì)α-synuclein在細(xì)胞內(nèi)蓄積的影響，以及LC3和HDAC6表達(dá)的變化。
　　 結(jié)果：100nM Rotenone對(duì)細(xì)胞生長活性幾乎沒有抑制作用，但光學(xué)顯微鏡檢測(cè)發(fā)現(xiàn)形態(tài)學(xué)發(fā)生

3、變化；免疫熒光結(jié)果顯示Rotenone給藥后，α-synuclein增多并聚集，且在核周形成聚集小體，LC3與HDAC6顯著上調(diào)，同樣也形成類似聚集小體的結(jié)構(gòu)；Western blot的結(jié)果顯示Rotenone給藥后，α-synuclein與LC3的表達(dá)隨著時(shí)間的變化，呈現(xiàn)出先增多后減少的趨勢(shì)；免疫熒光雙標(biāo)記結(jié)果顯示，含α-synuclein的聚集小體與HDAC6蛋白共表達(dá)，LC3與α-synuclein、HDAC6與LC3也存在共表達(dá)

4、現(xiàn)象；在Rotenone給藥前預(yù)先加入3-MA，WST-1結(jié)果顯示細(xì)胞生長活性明顯受到抑制；免疫熒光結(jié)果顯示α-synuclein表達(dá)增多其聚集現(xiàn)象更加明顯，而HDAC6在一定程度上表達(dá)減少；Western blot結(jié)果顯示α-synuelein隨時(shí)間的變化呈現(xiàn)相對(duì)高的水平；在Rotenone給藥前預(yù)先加入Rapamycin，免疫熒光與Western blot結(jié)果顯示α-synuclein表達(dá)減少；而HDAC6表達(dá)增高。