Cathepsin L在6-OHDA損傷SH-SY5Y細(xì)胞中的作用.pdf

1、目的：研究溶酶體組織蛋白酶L(Cathepsin L)在6-羥基多巴胺(6-OHDA)誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞死亡中的作用，初步探討Cathepsin L在帕金森病發(fā)病中的機(jī)制。 方法：采用6-OHDA處理人神經(jīng)母細(xì)胞瘤株SH-SY5Y細(xì)胞建立帕金森病(PD)細(xì)胞模型，處理組在6-OHDA給藥前加入選擇性Cathepsin L抑制劑Z-FY-DMK(10μM)，用乳酸脫氫酶(LDH)活性檢測法及Annexin V和PI雙染的方法

2、觀察Z-FY-DMK對(duì)6-OHDA誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞死亡的作用。免疫組化、Westernblot法觀察Cathepsin L在6-OHDA誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞死亡中的分子機(jī)制。 結(jié)果：用6-OHDA處理后，免疫組化結(jié)果顯示，Cathepsin L從溶酶體異位到細(xì)胞質(zhì)，Western Blot結(jié)果顯示，Cathepsin L表達(dá)量明顯增加。LDH和Annexin V、PI雙染結(jié)果顯示，Z-FY-DMK能減輕6-OHDA的

3、細(xì)胞毒性，并且部分抑制6-OHDA所誘導(dǎo)的凋亡。Western Blot結(jié)果表明，Z-FY-DMK處理組全長Bid表達(dá)增加，且部分抑制了6-OHDA所誘導(dǎo)的NF-κB核轉(zhuǎn)位，而IκB-α的表達(dá)恢復(fù)到正常水平，凋亡相關(guān)蛋白Bax、P53、PUMA、Caspase-3表達(dá)量減少及抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)上調(diào)。 結(jié)論：Cathepsin L在6-OHDA誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞死亡過程中發(fā)揮重要作用。在6-OHDA的作用下，激活的C