石斛合劑對H2O2損傷的SH-SY5Y細胞保護作用及機制研究.pdf

1、目的：
　　觀察石斛合劑(DC)對過氧化氫(H2O2)誘導的人神經(jīng)母細胞瘤細胞(SH-SY5Y)氧化損傷的作用，探討石斛合劑的保護作用及其可能機制。
　　方法：
　　過氧化氫誘導處理SH-SY5Y細胞，分成5組，正常組、模型組、5％DC組、10％DC組、15％DC組。MTT法檢測細胞活力、細胞外LDH漏出量及細胞內(nèi)MDA、SOD和GSH水平;流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡率及線粒體膜電位變化;DAPI染色觀察各組細胞核形態(tài)學變

2、化;WB檢測bax、bcl-2、caspase3蛋白表達水平;qPCR檢測caspase3基因表達水平。
　　結(jié)果：
　　(1)MTT檢測細胞活力，過氧化氫處理細胞1小時后，與正常組比較，其余各組細胞活力明顯下降(P＜0.05或P＜0.01)，石斛合劑各組細胞活力明顯升高(P＜0.05或P＜0.01)。
　　(2)細胞經(jīng)H2O2損傷后細胞膜通透性增加，LDH漏出率及細胞內(nèi)MDA含量顯著增加(P＜0.01)，SOD和GS

3、H顯著降低(P＜0.01);經(jīng)石斛合劑處理后，LDH漏出率和細胞內(nèi)MDA含量顯著降低(_P＜0.01)，SOD和GSH活力增高明顯（P＜0.01或P＜0.05）。
　　(3)細胞經(jīng)處理后，以AnnexinⅤ-FITC/PI雙染后上流式細胞儀檢測，與正常組比較，模型組細胞的凋亡率明顯升高(P＜0.01)，而石斛合劑各組的細胞凋亡率降低，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。JC-1染色觀察MMP變化，與正常組比較，H2O2組細胞綠/紅

4、熒光強度比值顯著增加(P＜0.01)，經(jīng)石斛合劑干預(yù)后，細胞綠/紅熒光強度比值顯著降低(P＜0.01)。DAPI染色后，在熒光顯微鏡下發(fā)現(xiàn)正常組細胞核染色均勻，核圓形或橢圓形，H2O2組細胞胞核內(nèi)可見致密的顆粒狀熒光，呈現(xiàn)出凋亡細胞典型的核固縮、核斷裂表現(xiàn);石斛合劑各組細胞核形態(tài)趨于正常，凋亡細胞數(shù)量明顯減少。
　　(4)WB檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，氧化損傷后SH-SY5Y細胞bcl-2低表達但Bax、caspase3高表達，Bax/bcl

5、-2比值升高，石斛合劑各組有效抑制了H2O2的作用，使Bax/bcl-2比值及caspase3表達降低。
　　(5)qPCR分析顯示，H2O2組細胞caspase3 mRNA表達明顯增加，經(jīng)石斛合劑處理后逆轉(zhuǎn)上述基因的表達，從而達到抗凋亡的作用。
　　結(jié)論：
　　(1)400umol/LH2O2誘導損傷1h能顯著降低SH-SY5Y細胞的活力，并誘導細胞出現(xiàn)凋亡，可作為神經(jīng)退行性疾病的細胞模型。
　　(2)石斛合劑