人神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y細(xì)胞凋亡及分化調(diào)控的初步研究.pdf

1、人神經(jīng)母細(xì)胞瘤是一種由新生兒的神經(jīng)嵴衍生的腫瘤,它是發(fā)生在兒童中的一種最常見的實(shí)體瘤.但與其他的人類腫瘤相比,神經(jīng)母細(xì)胞瘤也是自發(fā)衰退率最高的腫瘤之一.SH-SY5Y細(xì)胞是人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系SK-N-SH中的一個克隆,它是研究神經(jīng)細(xì)胞終末分化的一個極有用的模型.細(xì)胞分化往往會引起細(xì)胞內(nèi)一系列分子事件的改變,進(jìn)而影響細(xì)胞對一些凋亡刺激敏感性的改變.早期文獻(xiàn)報道,分化細(xì)胞中Bcl2的高表達(dá)可以使分化細(xì)胞對一些藥物刺激不敏感.HSP90是一

2、個重要的分子伴侶,參與細(xì)胞增殖、凋亡、分化等重要的生物學(xué)過程.為了探討HSP90在SH-SY5Y細(xì)胞的分化與凋亡中是否也發(fā)揮關(guān)鍵作用,本研究檢測了未分化的與RA誘導(dǎo)的分化的SH-SY5Y細(xì)胞對熱休克和GA兩種刺激的不同反應(yīng).其中熱休克是HSP90潛在的誘導(dǎo)劑,而GA是HSP90功能的特異抑制劑.結(jié)果表明,熱休克(45℃,30 min)誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞發(fā)生少量的凋亡.流式細(xì)胞儀檢測、Hoechst 33258核染分析及PARP降解分

3、析顯示,與未分化細(xì)胞相比,分化細(xì)胞對同樣條件的熱休克更為敏感,凋亡細(xì)胞的比例明顯增加.競爭性RT-PCR方法和Western blot結(jié)果顯示,熱休克誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞中hsp90α mRNA和蛋白水平增加.分化細(xì)胞內(nèi)hsp90αmRNA的水平比正常細(xì)胞大為增加,熱休克處理后其水平不再繼續(xù)升高.熱休克也誘導(dǎo)了Akt及三種MAPK激酶:ERK,JNK,p38磷酸化水平以及轉(zhuǎn)錄因子c-Jun和c-Fos表達(dá)水平的升高,但降低了Bcl2的

4、表達(dá).綜上所述,我們發(fā)現(xiàn)熱休克引起的HSP90的增加與Akt和ERK磷酸化水平的增加相一致,而當(dāng)HSP90的功能被GA抑制,細(xì)胞內(nèi)Akt和ERK磷酸化的水平也隨之降低.SH-SY5Y細(xì)胞在熱休克處理后僅出現(xiàn)極低比例的凋亡,表明HSP90的增加提供了一定的熱休克保護(hù)作用.而當(dāng)HSP90的功能被GA抑制時,細(xì)胞的存活率大為降低;分化細(xì)胞內(nèi)HSP90的表達(dá)水平較高,所以分化細(xì)胞對相同條件的GA處理不如分化前細(xì)胞敏感,提示HSP90可能在SH-