WT1抗原多表位基因疫苗設(shè)計及免疫原性研究.pdf

1、WT1（Wilms’tumor gene 1）是最早發(fā)現(xiàn)與Wilms’腫瘤發(fā)生發(fā)展有關(guān)的基因，在成人僅在少量的正常組織表達(dá)，但在各型白血病、骨髓異常增生綜合征及多種實(shí)體瘤呈高表達(dá)，并與疾病的不良預(yù)后有相關(guān)性。反義寡核苷酸抑制WT1表達(dá)，致使白血病細(xì)胞及實(shí)體瘤細(xì)胞生長停止，以及WT1能誘導(dǎo)特異性的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（cytotoxic T lymphocyte,CTL）反應(yīng)均提示W(wǎng)T1可作為廣譜性免疫治療的理想靶原。迄今，基于WT1的表位

2、肽疫苗已進(jìn)入臨床試驗(yàn)，并初見成效。然而目前研究者多采用單一CTL表位的疫苗，難免免疫原性差，且由于T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答受主要組織相容性復(fù)合物(major histocompatibility complex，MHC)限制性，某一WT1的表位疫苗可能僅僅適用于少部分人類白細(xì)胞抗原(human leukocytes antigen，HLA)相合的患者，因此該疫苗的應(yīng)用受到限制。構(gòu)建多表位WT1的核酸疫苗可以彌補(bǔ)上述缺點(diǎn)，其優(yōu)越性表現(xiàn)為：①內(nèi)

3、源性表位提呈可避免表位肽的降解，產(chǎn)生持久的細(xì)胞和體液免疫應(yīng)答；②同時構(gòu)建WT1的多個優(yōu)勢表位或受不同HLA限制性的表位，可有效應(yīng)防止免疫逃逸和突破HLA限制；③同時構(gòu)建WT1輔助性T細(xì)胞(helper T cell,Th)表位，其激發(fā)的CD4+T細(xì)胞，不僅可以更有效的激發(fā)和維持CTL免疫應(yīng)答，而且可以產(chǎn)生特異性的抗腫瘤應(yīng)答[1]；④易于設(shè)計和構(gòu)建，且制備和貯存方便。此外，根據(jù)具體需要，可以將免疫調(diào)節(jié)因子構(gòu)建于載體使其共表達(dá)，誘導(dǎo)產(chǎn)生最適

4、免疫應(yīng)答。因此，多表位基因疫苗在WT1抗原免疫治療中具有廣泛應(yīng)用前景。基因佐劑是提高基因疫苗免疫效果的有效手段，研究表明，結(jié)核分枝桿菌熱休克蛋白HSP70（mHSP70）是良好的免疫佐劑，其羧基端HSP70359-610是其有效佐劑部位，可與CD40分子結(jié)合，通過p38信號通路誘導(dǎo)DC的成熟和極化Th1反應(yīng)。而HSP70407-426是位于mHSP70多肽結(jié)合區(qū)p359-610的一個刺激表位，選擇該區(qū)域能比HSP70更顯著的刺激DCs成

5、熟，且這種作用不會被HSP70抑制表位p457-496所抑制[2]。因此，mHSP70407-426作為天然免疫佐劑在基因疫苗開發(fā)中具有潛在應(yīng)用價值。經(jīng)查閱文獻(xiàn)，目前國內(nèi)外尚未見有WT1多表位基因疫苗的報道，本文擬利用基因工程的方法將WT1多個CTL和Th細(xì)胞表位克隆至真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1中，構(gòu)建WT1抗原多表位基因疫苗pcDNA-WT1。為獲得更好的免疫效果，同時以mHSP70的刺激表位p407-426作為免疫佐劑，嘗試構(gòu)建W