重組鉤端螺旋體融合基因疫苗的免疫原性研究.pdf

1、鉤端螺旋體?。ê喎Q鉤體病）人獸共患并呈全球分布。我國是受鉤體病危害十分嚴重的國家，目前所使用的鉤體疫苗都具有血清群或型特異性且副作用較大。因此，研制具有廣泛交叉保護作用、副作用低的新型疫苗是當前急需解決的課題。 鉤體病的免疫以體液免疫為主，但也有細胞免疫的參與。DNA 疫苗是近年發(fā)展起來的一項新型疫苗技術，它能模擬病原體的自然感染過程，能有效誘導細胞免疫和體液免疫，已有文獻報道DNA 疫苗在鉤體感染模型中具有較好的免疫保護作用。

2、本研究主要進行以下兩方面的探索：一是改善免疫程序以提高鉤體DNA 疫苗的免疫效力，二是構建融合基因以期增加抗原分子的免疫原性，提高免疫效果。 選取鉤體外膜蛋白免疫保護性或免疫原性較好的四個基因lipL21,lipL32, lipL41 和ompL1 ，分別構建成融合基因lipL21-lipL32 和lipL32-lipL41-ompL1。融合基因分別與真核表達載體pVAX1 和原核表達載體pET28b(+)重組并制備其DNA

3、疫苗和蛋白疫苗，按DNA-DNA、DNA-蛋白、蛋白-蛋白三種免疫程序免疫BALB/c 小鼠，檢測各實驗組誘導細胞免疫應答和體液免疫應答的水平，同時通過與目前研究認為免疫保護性較好的 lipL32基因進行平行比較來評價重組融合基因疫苗的免疫效果。 實驗結果顯示 DNA疫苗能誘導較強的細胞免疫應答，在脾細胞增殖實驗及一些細胞因子的檢測中，DNA-DNA組、DNA-蛋白組能誘導實驗小鼠產生更強的細胞免疫反應。而 DNA-蛋白組、蛋

4、白-蛋白組在誘導體液免疫應答方面具有明顯優(yōu)勢，特異性抗體檢測、顯微凝集試驗（MAT） 結果證明這兩組在誘導小鼠體液免疫反應方面與對照組及 DNA-DNA組都具有顯著差異。由此可見，DNA-蛋白組在誘導細胞和體液免疫方面的綜合效果最好，值得進一步研究和深化。 在融合基因與 lipL32 基因平行比較疫苗免疫效果時發(fā)現，lipL32-lipL41-ompL1融合基因疫苗在誘導實驗小鼠體液和細胞免疫應答時各指標優(yōu)于 lip

5、L32基因或與其相似，而融合基因 lipL21-lipL32的疫苗免疫效果不如 lipL32基因，此結果顯示 lipL32-lipL41-ompL1融合基因很有可能成為較好的鉤體疫苗候選抗原基因組合。 本實驗首次成功構建 lipL32-lipL41-ompL1融合基因，證實其疫苗免疫效果優(yōu)于 lipL32基因，并證明了 DNA疫苗初次免疫、蛋白疫苗加強免疫策略能誘導實驗小鼠較強的體液和細胞免疫應答，為鉤體疫苗的后續(xù)研究打下了基