豬痢疾短螺旋體的檢測、感染情況調(diào)查及免疫原性的初步研究.pdf

1、豬痢疾（Swinedysentery，SD）是由豬痢疾短螺旋體（Brachyspirahyosenteriae，B.hyo）引起的一種危害比較嚴重的腸道傳染病。主要致病部位在結腸，引起豬的粘液性、出血性下痢，嚴重時還可引起豬的死亡。豬痢疾短螺旋體兩端尖呈蛇形，長約6μm～8.5μm，直徑為320～380nm，多為4～6個疏螺彎曲，為革蘭氏陰性菌，厭氧，對生長條件較為苛刻，分離較為困難。該病是豬腸道綜合征的重要病原之一，造成豬的生長緩慢、

2、飼料利用率低和成本增加，世界范圍廣泛流行，特別是發(fā)達國家，造成了嚴重的經(jīng)濟損失。相比國外，國內(nèi)的相關研究還比較少，因此，有必要進行其流行病學的調(diào)查和相關特性的研究。下面就從以下三個方面對本文的研究做個簡要概括:
　　1.TaqMan-MGB實時熒光定量PCR快速檢測豬痢疾短螺旋體的研究
　　為了提高豬痢疾短螺旋體的陽性檢測率，針對保守保守的NADHoxidase（nox）基因設計合成了一對引物和相應的探針，經(jīng)過優(yōu)化方法和條件

3、，建立了TaqMan-MGB實時熒光定量PCR方法，并且通過試驗驗證了此方法具有高度特異性、高靈敏度及較好的重復性。用構建的重組質(zhì)粒建立了標準曲線，線性相關系數(shù)為0.99，具有良好的線性關系，可以檢測最低為2.17個拷貝數(shù)的菌量，且沒有交叉反應。對107份樣本DNA進行檢測后，同普通PCR相比較，結果顯示該方法敏感、準確。此外，相比普通方法，該方法還具有耗時短，可以準確定量等特點，可以廣泛用于豬場屠宰場的豬痢疾的檢測和流行病學的調(diào)查。<

4、br>　　2.上海及周邊地區(qū)豬場豬痢疾短螺旋體病感染調(diào)查
　　為了更好地了解此病在各地豬場的感染情況和流行情況，自2010年10月份至2012年12月份從上海市動物疫病預防控制中心門診室，上海地區(qū)的五個屠宰場以及上海、浙江、河南等地的規(guī)?；i場采集了豬結腸和糞便臨床樣本624份。利用所建立的方法對其進行檢測，結果顯示不同癥狀、不同周齡的樣本，陽性率也不同，其中腹瀉癥狀為15％，無腹瀉癥狀為1.93％，2～5周齡、6～9周齡、10～

5、13周齡、14～17周齡和18～19周齡的豬痢疾短螺旋體的陽性檢出率分別為14％、22％、32％、13％、8.2％，屠宰場的陽性率很低，所檢樣本平均感染率為8.49％。豬群中仔豬和育成豬的感染率較高。通過厭氧培養(yǎng)成功分離得到一株豬痢疾短螺旋體SH-BH-1。上海及其周邊地區(qū)豬痢疾感染情況的調(diào)查為今后防控此病有了可靠的依據(jù)。
　　3.豬痢疾短螺旋體外膜蛋白BlpA原核表達、純化與免疫原性分析
　　根據(jù)豬痢疾短螺旋體外膜蛋白Bl