誘導(dǎo)重構(gòu)胚來源的小鼠胚胎干細(xì)胞分化為心肌細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的： 缺血性心臟病晚期往往需要進(jìn)行器官移植，但卻受到移植器官來源有限及移植后引發(fā)免疫排斥反應(yīng)等因素的限制。本文采用重構(gòu)胚來源的胚胎干細(xì)胞(NT-mESC)作為種子細(xì)胞，使用不同的誘導(dǎo)劑體外誘導(dǎo)分化為心肌細(xì)胞，建立了一種簡(jiǎn)便高效的誘導(dǎo)分化體系并在體外構(gòu)建工程化心肌組織，不僅為組織工程化心肌再造提供無限的細(xì)胞來源，還有望解決移植后引發(fā)的排斥問題。 方法： (1)在小鼠成纖維細(xì)胞(MEF)為滋養(yǎng)層和白血病抑制因子(L

2、IF)同時(shí)存在的條件下，NT-mESC體外培養(yǎng)時(shí)能保持良好的未分化狀態(tài)。 (2)用STLV型生物反應(yīng)器制備NT-mESC源的擬胚體(EBs)，采用不同的誘導(dǎo)劑將EBs誘導(dǎo)分化為心肌細(xì)胞并進(jìn)行鑒定。 (3)通過Percoll密度梯度離心富集NT-mESC來源的心肌細(xì)胞，將富集的心肌細(xì)胞與液態(tài)I型膠原及細(xì)胞外基質(zhì)膠(ECM gel)混合后構(gòu)建工程化心肌組織(心肌片層)，并對(duì)其進(jìn)行體外檢測(cè)。 結(jié)果： (1)建立

3、了以MEF和LIF協(xié)同作用為條件的NT-mESC的培養(yǎng)體系，優(yōu)化了培養(yǎng)條件。 (2)NT-mESC在STLV型生物反應(yīng)器中能高效地形成EBs，EBs中心區(qū)域未見明顯壞死，無廣泛的凝聚現(xiàn)象。在貼壁誘導(dǎo)分化培養(yǎng)后，以抗壞血酸、二甲基亞砜及維甲酸組成的聯(lián)合誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)EBs向心肌細(xì)胞分化的效率達(dá)87.54±3.4％。 (3)NT-mESC源的心肌細(xì)胞經(jīng)Peeoll密度梯度離心后，主要富集在第III層和第IV層，其純度分別為35±