小鼠胚胎干細(xì)胞定向分化為造血細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、胚胎干細(xì)胞(embryonic stem cells,ES cells)所具有的發(fā)育全能性已通過其與胚胎發(fā)育階段的任何組織嵌合的事實(shí)所證實(shí).這一特性已廣泛用于轉(zhuǎn)基因研究,也為科研工作者對特定發(fā)育階段干細(xì)胞的研究及治療應(yīng)用提供了有力工具.ES細(xì)胞生成血細(xì)胞的能力最初為Doetschman等關(guān)注.他們將ES細(xì)胞通過懸浮培養(yǎng)誘導(dǎo)分化并注意到具有多層囊狀結(jié)構(gòu)胚胎體的形成,其中許多胚體發(fā)育為含血紅蛋白的血島.科研工作者在研究中發(fā)現(xiàn)ES細(xì)胞誘導(dǎo)向造

2、血細(xì)胞分化過程中存在三個(gè)問題,第一,ES細(xì)胞誘導(dǎo)分化為造血細(xì)胞的分化效率低;第二,ES細(xì)胞向造血細(xì)胞分化過程中存在過度分化現(xiàn)象;第三,由于存在發(fā)育屏障,ES來源造血細(xì)胞難于植入成年受體重建造血.造血微環(huán)境在胚胎造血發(fā)育的啟動(dòng)及造血干細(xì)胞的發(fā)育完善過程中發(fā)揮了重要的調(diào)控作用.因此,科研工作者嘗試在體外模擬胚胎造血發(fā)育微環(huán)境以有效支持ES細(xì)胞向造血干細(xì)胞發(fā)育,但目前尚未建立公認(rèn)有效的、特異性支持造血發(fā)育的體外培養(yǎng)體系.本研究將嘗試使用卵黃囊

3、(yolk sac,YS)、胎肝(fetal liver,FL)和骨髓(bone marrow,BM)來源的基質(zhì)細(xì)胞條件培養(yǎng)液在體外模擬不同發(fā)育階段的造血微環(huán)境,比較應(yīng)用三種來源基質(zhì)細(xì)胞條件培養(yǎng)液及順序誘導(dǎo)方法生成ES來源造血細(xì)胞的造血重建功能.用卵黃囊基質(zhì)細(xì)胞條件培養(yǎng)液啟動(dòng)ES細(xì)胞的造血發(fā)育,并采用順序誘導(dǎo)的方法,使ES細(xì)胞在體外的造血發(fā)育過程經(jīng)歷類似于體內(nèi)造血位點(diǎn)的遷移過程,促進(jìn)ES來源的造血細(xì)胞逐步發(fā)育完善,從而獲得在成年受體體內(nèi)