LIP在真核細(xì)胞中過(guò)表達(dá)的功能研究.pdf

1、七鰓鰻屬于現(xiàn)存最古老的具有適應(yīng)性免疫系統(tǒng)的無(wú)頜類(lèi)脊椎動(dòng)物之一，可作為研究適應(yīng)性免疫系統(tǒng)進(jìn)化的模式生物。目前七鰓鰻免疫系統(tǒng)的研究一直傾向于可變淋巴受體(variable lymphocyte receptor, VLR)，而關(guān)于其細(xì)胞毒相關(guān)免疫分子的研究幾乎一片空白。而本實(shí)驗(yàn)室在七鰓鰻免疫系統(tǒng)中發(fā)現(xiàn)了一種靶向性殺傷腫瘤細(xì)胞的蛋白，命名為七鰓鰻免疫蛋白(Lamprey Immune Protein，LIP)。本實(shí)驗(yàn)室證實(shí)，LIP對(duì)多種腫瘤細(xì)

2、胞有靶向殺傷作用，但殺傷機(jī)制有待研究，LIP在七鰓鰻體內(nèi)的角色也是懸而未決的謎題。本文建立了LIP真核過(guò)表達(dá)系統(tǒng)，探究了LIP在H293T細(xì)胞以及HeLa細(xì)胞內(nèi)的功能。
　　本文通過(guò)分子克隆技術(shù)構(gòu)建了pIRES2-AcGFP1-Nuc-LIP(LIP與GFP獨(dú)立非融合表達(dá))和pEGFP-N1-LIP(LIP與GFP融合表達(dá))表達(dá)載體，用脂質(zhì)體法分別轉(zhuǎn)染兩種細(xì)胞，應(yīng)用蛋白質(zhì)免疫印跡法，實(shí)時(shí)熒光定量PCR，乳酸脫氫酶釋放檢測(cè)，細(xì)胞器染

3、色，細(xì)胞凋亡以及活性氧水平檢測(cè)，細(xì)胞周期分析，基因芯片，免疫熒光等方法驗(yàn)證真核重組LIP的表達(dá)及探究其功能。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)LIP在兩種細(xì)胞中成功過(guò)表達(dá);過(guò)表達(dá)LIP引起HeLa細(xì)胞LDH釋放，線(xiàn)粒體斷裂，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)空泡化，PS外翻，ROS爆發(fā)，P53信號(hào)通路激活以及細(xì)胞周期G2M期阻滯的現(xiàn)象。以上現(xiàn)象在空載質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞以及H293T細(xì)胞中均未發(fā)現(xiàn)。而對(duì)H293T細(xì)胞，過(guò)表達(dá)LIP主要激活了胞內(nèi)IgA的產(chǎn)生通路。
　　本文結(jié)果