細(xì)粒棘球蚴內(nèi)蒙株核酸疫苗構(gòu)建及在真核細(xì)胞中的表達(dá).pdf

1、細(xì)粒棘球蚴病是由細(xì)粒棘球絳蟲(Echinociccinae granulosus；Eg)的幼期細(xì)粒棘球蚴寄生于人或動(dòng)物體內(nèi)所引起的一種重要的人畜共患寄生蟲病。不同宿主和地理環(huán)境的細(xì)粒棘球蚴間存在實(shí)質(zhì)性的基因遺傳差異，具有明顯的地理株特點(diǎn)。FABP和Eg95是免疫預(yù)防細(xì)粒棘球蚴病很有前途的疫苗侯選分子?？寺”镜叵x株的疫苗候選基因構(gòu)建核酸疫苗對(duì)于細(xì)粒棘球蚴病的預(yù)防具有較好的針對(duì)性和特異性。 利用PCR技術(shù)擴(kuò)增細(xì)粒棘球蚴內(nèi)蒙株FABP

2、基因，T載體克隆測(cè)序。FABP-DNA序列全長482bp，與已報(bào)道的國內(nèi)新疆株FABP-DNA同源性為100％；與國外株FABP-DNA同源性為99％，表明FABP基因具有地理株差異?？寺〉腇ABP-cDNA序列全長402bp，推導(dǎo)ORF為399bp，編碼133個(gè)氨基酸，序列與由基因DNA序列外顯子推導(dǎo)出的編碼序列一致，編碼蛋白質(zhì)的分子量為15.095Kda。 FABP-cDNA片段亞克隆到原核表達(dá)載體pET44a(+)上構(gòu)建重

3、組質(zhì)粒pET-FABP，在E. coli BL(21)中誘導(dǎo)表達(dá)了預(yù)期大小的目的蛋白并純化，進(jìn)而免疫小鼠制備了效價(jià)高、特異性強(qiáng)的多克隆抗體。 利用本研究克隆的細(xì)粒棘球蚴內(nèi)蒙株FABP-cDNA和本實(shí)驗(yàn)室保存的EG95-cDNA構(gòu)建真核表達(dá)載體pEGFP-FABP和pEGFP-EG95，轉(zhuǎn)染綿羊胎兒成纖維細(xì)胞，結(jié)果表明FABP-cDNA和EG95-cDNA可以在真核細(xì)胞中與綠色熒光蛋白融合表達(dá)。將FABP-cDNA和EG95-cD