黑加侖提取物保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：本研究采用過氧化氫(H2O2)體外誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vascular endothelial cells，ECV-304)損傷，建立ECV-304氧化損傷模型，觀察黑加侖提取物對(duì)損傷ECV-304的保護(hù)作用，并探討其機(jī)制。方法：1.體外ECV-304氧化損傷的建立：實(shí)驗(yàn)分正常對(duì)照組，H2O2組(濃度分別為0.40mmol/L,2.00mmol/L，10.00mmol/L)，用H2O2分別作

2、用于培養(yǎng)24、48、72h后的ECV-304細(xì)胞損傷4h后，測(cè)定各組細(xì)胞四嘩鹽(MTT)指標(biāo)，并觀察各組細(xì)胞形態(tài)變化。2.黑加侖提取物對(duì)體外ECV-304氧化損傷保護(hù)作用的研究： 實(shí)驗(yàn)分①正常對(duì)照組： ②陰性對(duì)照組(二甲基亞砜)； ③H2O2模型組(H2O2濃度為2.00mmol/L)； ④受試物低、中、高濃度組在培養(yǎng)基中先加入終濃度為3.13μg/mL、12.50μg/mL和50.00μg/mL的黑加

3、侖提取物孵育24小時(shí)，再加入2.00mmol/L的H2O2誘導(dǎo)損傷 ⑤陽(yáng)性對(duì)照組培養(yǎng)基中先加入終濃度為100.00μmol/L的維生素E孵育24小時(shí)，再加入2.00mmol/L的H2O2誘導(dǎo)損傷；收集細(xì)胞，測(cè)定各組細(xì)胞活力(OD值)、一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)以及乳酸脫氫酶(LDH)、內(nèi)皮素(ET)和前列環(huán)素(PGl2)的穩(wěn)定代謝物6-Keto-PGFla。3.黑加侖提取物拮抗H2O2誘導(dǎo)的ECV-304凋亡：實(shí)驗(yàn)分組

4、和條件同2，誘導(dǎo)凋亡后收集細(xì)胞，流式細(xì)胞術(shù)Annexin V-FITC/PI雙染標(biāo)記法測(cè)定細(xì)胞凋亡率。結(jié)果：1.體外ECV-304氧化損傷模型的建立： ①不同濃度H2O2損傷組與正常對(duì)照組細(xì)胞形態(tài)光鏡下差別顯著。隨著H2O2濃度的提高，損傷越重，形態(tài)學(xué)改變?cè)矫黠@。 ②H2O2模型組與正常對(duì)照組細(xì)胞活力(OD值)均有差別，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，隨著H2O2濃度的升高，細(xì)胞活力(OD值)有降低的趨勢(shì)。2.黑加

5、侖提取物對(duì)體外ECV-304氧化損傷保護(hù)作用的研究：受試物3.13μg/mL～50.00μg/mL組大部分細(xì)胞仍保持多角形，細(xì)胞形態(tài)、結(jié)構(gòu)基本清晰，部分細(xì)胞裂解為碎片狀、漂浮。陰性對(duì)照組細(xì)胞則無(wú)明顯改變，陽(yáng)性對(duì)照組細(xì)胞呈多角形，排列有所紊亂。模型組NO、PGI2含量均低于正常對(duì)照組(P＜0.01)，MDA、ET含量及LDH活力均明顯高于正常對(duì)照組(P〈0.01)，除陰性對(duì)照組外(P＞0.05)，正常對(duì)照組，黑加侖提取物中、高劑量組，陽(yáng)性

6、對(duì)照組分別與H2O2模型組比較，細(xì)胞活力(OD值)及NO、PGl2含量均顯著升高(P〈0.05或者P〈0.01)，MDA、ET含量及LDH活力顯著降低(P〈0.05或者P〈0.01)。3.黑加侖提取物拮抗。H2O2誘導(dǎo)的ECV-304凋亡：黑加侖提取物低、中、高劑量組，陽(yáng)性對(duì)照組和正常對(duì)照組早期凋亡率和總凋亡率明顯低于H2O2模型組；黑加侖提取物組隨著濃度的增高，早期凋亡率和總凋亡率逐漸降低。結(jié)論：1、H2O2可誘導(dǎo)ECV-304

7、損傷，且隨其濃度不同，使ECV-304受損程度不同。H2O2作用時(shí)間4小時(shí)及濃度2.00mmol/L時(shí)為適合本實(shí)驗(yàn)研究的最佳條件。2、黑加侖提取物各劑量都能提高內(nèi)皮細(xì)胞的活力，增加NO、PGI2含量，降低MDA、ET含量及LDH活力，且呈現(xiàn)一定的濃度依賴性。從而可以認(rèn)為黑加侖提取物對(duì)H2O2誘導(dǎo)的ECV-304損傷有明顯的保護(hù)作用。3、黑加侖提取物及維生素E可降低H2O2誘導(dǎo)的ECV-304凋亡的早期凋亡率和總凋亡率。4、黑加侖提