香煙提取物對(duì)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷及阿托伐他汀的干預(yù).pdf

1、背景：周圍血管缺血性疾病如動(dòng)脈硬化閉塞(AS)、血栓閉塞性脈管炎(TAO)是血管外科比較常見的疾病，其病因不清、治療棘手、療效不理想，尤其是血栓閉塞性脈管炎。吸煙是此類疾病發(fā)生發(fā)展的重要危險(xiǎn)因素，而此類疾病的始動(dòng)因素則往往是血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷，因此，探究吸煙對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷有利于我們了解此類疾病發(fā)生機(jī)制。本文采用體外細(xì)胞培養(yǎng)的方法來探究香煙提取物對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷，并同時(shí)探究阿托伐他汀對(duì)該損傷的干預(yù)作用，以期為臨床該類疾病的預(yù)防和

2、治療提供新的思路和途徑。
　　目的：探討香煙提取物(CSE)對(duì)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)的生長(zhǎng)、形態(tài)、一氧化氮(NO)的生成、一氧化氮合成酶(NOS)的活性和細(xì)胞間粘附分子-1(ICAM-1)蛋白表達(dá)的影響作用，以及探討阿托伐他汀對(duì)該作用的干預(yù)。
　　方法：采用體外培養(yǎng)的人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，將細(xì)胞分為：①正常對(duì)照組：用含體積分?jǐn)?shù)10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)；②香煙提取物組：在體積分?jǐn)?shù)10％胎牛血清的

3、DMEM培養(yǎng)基中加入香煙提取物使其終濃度為10％；③香煙提取物邯可托伐他汀組：在體積分?jǐn)?shù)10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中加入阿托伐他汀使其終濃度為10μmol/L，作用細(xì)胞4h后，再加入香煙提取物使其終濃度為10％。采用倒置顯微鏡觀察各組細(xì)胞形態(tài)的變化，MTT法檢測(cè)細(xì)胞的抑制率，硝酸還原酶法檢測(cè)細(xì)胞上清液中的一氧化氮值，免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)細(xì)胞一氧化氮合成酶活性，Western blotting檢測(cè)ICAM-1蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)

4、果：在倒置光學(xué)顯微鏡100倍下可觀察到受香煙提取物刺激后的細(xì)胞較正常對(duì)照組細(xì)胞形態(tài)變不規(guī)則，細(xì)胞排列稀疏、紊亂，部分細(xì)胞碎裂、胞漿胞核分離、并且有部分細(xì)胞凋亡，存活率降低；而加入了阿托伐他汀的細(xì)胞形態(tài)稍不規(guī)則，有個(gè)別細(xì)胞出現(xiàn)胞漿胞核分離，但較香煙提取物組有明顯改善。同時(shí)，用硝酸還原酶法檢測(cè)到香煙提取物組細(xì)胞一氧化氮生成量較對(duì)照組明顯減少(p<0.05)，而阿托伐他汀組細(xì)胞一氧化氮生成量與對(duì)照組相比并無明顯差別(p>0.05)。免疫細(xì)胞化

5、學(xué)結(jié)果顯示受香煙提取物刺激后的內(nèi)皮細(xì)胞胞漿內(nèi)一氧化氮合成酶棕褐色染色強(qiáng)度明顯減弱，陽性細(xì)胞的百分率降低(P<0.05)，而阿托伐他汀組細(xì)胞染色強(qiáng)度及陽性細(xì)胞的百分率較對(duì)照組并無明顯差別(p>0.05)。Western blotting檢測(cè)ICAM-1蛋白表達(dá)情況表明：香煙提取物組細(xì)胞ICAM-1蛋白表達(dá)較對(duì)照組明顯增加(p<0.05)，阿托伐他汀組細(xì)胞較正常對(duì)照組無明顯差異(p>0.05)。
　　結(jié)論：通過本實(shí)驗(yàn)研究表明，香煙提取

6、物作用于培養(yǎng)的人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)改變、生長(zhǎng)受抑制、一氧化氮生成減少，一氧化氮合成酶活性降低，ICAM-1蛋白表達(dá)增加；阿托伐他汀可在一定程度上拮抗香煙提取物引起的細(xì)胞形態(tài)改變、生長(zhǎng)受抑制、一氧化氮生成減少，一氧化氮合成酶活性降低，ICAM-1蛋白表達(dá)增加。故香煙提取物可能通過上述機(jī)制引起血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷進(jìn)而導(dǎo)致周圍血管缺血性疾病的發(fā)生發(fā)展，而阿托伐他汀則能通過上述機(jī)制拮抗香煙提取物對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷作用，可能對(duì)周圍血管缺