碘海醇對臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的影響及阿托伐他汀的干預(yù)作用.pdf

1、隨著醫(yī)學(xué)發(fā)展，造影劑在臨床使用越來越廣泛，使用量越來越多，盡管造影劑不斷改良，但由于造影劑導(dǎo)致的并發(fā)癥發(fā)生率日益增高。造影劑腎病是目前最嚴(yán)重的造影劑并發(fā)癥之一，造影劑腎病已成為急性醫(yī)源性腎衰竭的第三大原因，使患者住院時間延長，治療費用增加，降低患者遠期生存率及生存質(zhì)量，但對于造影劑腎病的發(fā)病機制及預(yù)防仍處于探索階段。有研究證實造影劑可導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂。他汀類藥物是目前臨床廣泛用于調(diào)節(jié)患者血脂的一類藥物，但臨床及實驗室研究均發(fā)現(xiàn)阿

2、托伐他汀可以通過多種途徑改善血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能，但對于阿托伐他汀能否改善造影劑導(dǎo)致的血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷實驗報道較少。臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞具有人體內(nèi)絕大多數(shù)血管內(nèi)皮細(xì)胞代謝和對外界生理、毒理反應(yīng)特征，常被作為研究血管內(nèi)皮模型。
　　目的：
　　本研究以臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞為模型，試圖通過觀察碘海醇及碘海醇與阿托伐他汀共同作用下內(nèi)皮細(xì)胞增殖情況，凋亡情況，eNOS蛋白及ET-1的分泌情況，探討碘海醇對內(nèi)皮細(xì)胞損傷的可能機制，及造影劑腎病發(fā)病機

3、制并提供相關(guān)線索，為更好的預(yù)防、治療造影劑腎病提供理論支持。
　　方法:
　　體外培養(yǎng)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞，將細(xì)胞分為:1、正常對照組，2、溶劑對照組，3、碘海醇組，4、碘海醇加0.1μ mol/L阿托伐他汀組，5、碘海醇加1.0μ mol/L阿托伐他汀組，6碘海醇加10μ mol/L阿托伐他汀組。
　　1、CCK8試劑盒檢測細(xì)胞增殖情況:將對數(shù)生長期的細(xì)胞接種到96孔板，待細(xì)胞生長到對數(shù)生長期，予以加藥及對照組處理，

4、培養(yǎng)12小時后按CCK8說明書操作避光孵育2.0小時，測量OD值大小。用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理，分析各組間臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖情況是否有統(tǒng)計學(xué)差異。
　　2、TUNNEL染色法檢測細(xì)胞凋亡:將對數(shù)生長期的細(xì)胞接種到預(yù)先置有蓋玻片的六孔板中，待細(xì)胞生長到對數(shù)生長期，予以加藥及溶劑對照處理。按照細(xì)胞凋亡測試盒（TUNNEL法）說明書染色，在顯微鏡下觀察細(xì)胞凋亡情況，計算調(diào)亡指數(shù)。SPSS19.0統(tǒng)計軟件分析不同藥物及相同

5、藥物不同濃度處理后細(xì)胞的凋亡指數(shù)差異是否有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　3、蛋白質(zhì)印跡法(western blot)分析:按上述情況造模后，提取總蛋白。蛋白質(zhì)印跡法檢測不同組臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)的eNOS因子的蛋白表達水平及ET-1的分泌情況。SPSS19.0統(tǒng)計軟件分析各組細(xì)胞蛋白表達差異是否有統(tǒng)計學(xué)差異。
　　4、Real-time PCR分析:按上述造模后提取總RNA。Real-time PCR測量轉(zhuǎn)錄水平mRNA的表達，

6、各組間eNOS mRNA、ET-1 mRNA的表達水平用SPSS19.0統(tǒng)計軟件分析，觀察各組之間eNOS、ET-1基因表達差異是否有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1、CCK8試劑盒檢測細(xì)胞增殖，與1組培養(yǎng)的臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞相比，3組內(nèi)皮細(xì)胞的增殖明顯受到抑制，差異具有顯著性(P＜0.05)。4、5、6組與3組相比，當(dāng)藥物濃度達到1.0μmol/L及以上時，增殖情況得到顯著改善，呈濃度依賴性，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。

7、
　　2、TUNNEL染色法檢測細(xì)胞凋亡結(jié)果提示，與1組相比，3組內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡指數(shù)明顯增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。4(0.1μ mol/L藥物組)、5(1.0μmol/L藥物組)、6（10μmol/L藥物組）的細(xì)胞凋亡指數(shù)逐漸降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　3、Western blot結(jié)果提示，比較1與3組，3組eNOS的蛋白表達受到明顯抑制，而ET-1的分泌明顯增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.0

8、5)。5組、6組eNOS的表達明顯增加，ET-1的分泌明顯減少，這種變化趨勢隨著藥物濃度的增加而增大，呈濃度依賴性，差異顯著(P＜0.05)。
　　4、Real-time PCR結(jié)果，1組提示正常條件下內(nèi)皮細(xì)胞eNOS mRNA、ET-1 mRNA均有轉(zhuǎn)錄，3組細(xì)胞中，eNOS mRNA轉(zhuǎn)錄受到明顯抑制，ET-1 mRNA轉(zhuǎn)錄水平明顯上調(diào)。5、6組eNOS mRNA的轉(zhuǎn)錄水平逐漸增加，ET-1 mRNA的轉(zhuǎn)錄水平逐漸下降，差異與濃

9、度相關(guān)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　碘海醇可以抑制臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，eNOS的表達下降，ET-1的分泌增加;阿托伐他汀可以改善碘海醇對內(nèi)皮細(xì)胞的損傷，促進臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，減少內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡、上調(diào)eNOS的表達、下調(diào)ET-1的分泌。碘海醇可能是通過上述機制導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞的損傷，促使血管痙攣，促進、誘發(fā)造影劑腎病的發(fā)生、發(fā)展;阿托伐他汀可能是通過上述機制預(yù)防、改善碘海醇對血管內(nèi)皮細(xì)