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文檔簡介
1、肌鈣蛋白復合物由肌鈣蛋白C、肌鈣蛋白I和肌鈣蛋白T三個不同的亞基組成,在Ca2+作用下,主要參與肌肉的收縮調(diào)節(jié)。肌鈣蛋白I作為一個亞單位主要抑制肌球蛋白ATP酶的活性。心肌肌鈣蛋白I不在任何骨骼肌組織中表達,具有心肌組織特異性,這使得其成為檢測心肌損傷最好的生化標志物之一。研究表明急性心肌梗死患者胸痛發(fā)生的早期心肌肌鈣蛋白I就被釋放入血流,14~36小時其濃度達到最高峰。心肌損傷后的3~7天仍能檢測到心肌肌鈣蛋白I水平的升高。因此,心肌
2、損傷的檢測可通過檢測血清中心肌肌鈣蛋白I的水平來進行,并且具有靈敏度高、特異性強和診斷窗口期長的特點。進一步研究表明急性冠脈綜合癥死亡風險與心肌肌鈣蛋白I的水平具有相關(guān)性。在一些非致死的心肌損傷、充血性心衰等心臟疾病中也檢測到心肌肌鈣蛋白I水平的升高。目前,心肌肌鈣蛋白I已成為臨床上診斷心肌損傷的“金標準”。 本研究的目的是制備重組人心肌肌鈣蛋白I(recombinant human cardiac troponinI,rhcT
3、nI)的單克隆抗體,并對其特性進行鑒定,為cTnI診斷試劑盒的研制奠定基礎(chǔ)。 利用已構(gòu)建的基因工程菌株,大量表達、純化重組目的蛋白。純化后的目的蛋白作為抗原常規(guī)免疫Balb/c小鼠,取其脾細胞與同系骨髓瘤細胞Sp2/0進行常規(guī)融合,甲基纖維素半固體培養(yǎng)基法篩選雜交瘤細胞株,利用ELISA、Western blotting等方法鑒定單克隆抗體的性質(zhì)。 篩選出3株穩(wěn)定分泌抗重組目的蛋白抗體的雜交瘤細胞株,分別命名為4B3、7
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