褪黑素單克隆抗體的制備、鑒定及初步應(yīng)用.pdf

1、褪黑素(N- 乙酰-4- 甲氧基色胺,melatonin,簡稱MT).最近很多學(xué)者提供的體外研究資料表明,MT有作為自由基清除劑和總的抗氧化劑的作用.應(yīng)用EPR技術(shù)證實其清除羥自由基的作用遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過谷胱甘肽,黃酮和一些吲哚結(jié)構(gòu)類似物如serotonin,trytophan.它清除過氧自由基劑的作用超過維生素C和GSH,這些有名的自由基清除劑.目前對MT的興趣可通過數(shù)量不斷增長的許多直接或間接與其有關(guān)論文見證,在過去十年平均每年的有關(guān)MT和

2、作用于肌受體周圍的新的化合物的論文都成倍增長.在某種意義上說,稱MT為黑暗激素,主要是由于在某一時間的特定濃度分布似乎更合適.然而缺少一種簡便、靈敏、可靠的方法來檢測MT是闡明其生理和病理作用的一個最大障礙[2-4]. 在最初嘗試用生物檢測法、氣相色譜-質(zhì)譜來檢測MT在體液中的量,后來通過高效液相色譜[6-8],這些技術(shù)主要的限制是過于昂貴檢測樣品少.檢測前樣品處理復(fù)雜[3,4] .為了更進(jìn)一步地研究松果體的功能,也為更深入了解藥物受體

3、的內(nèi)在反應(yīng),為建立更完善的MT受體模型和設(shè)計新的可選性配體,為MT和其類似物治療應(yīng)用提供堅實的基礎(chǔ),我們制備和鑒定了抗MT的單克隆抗體.通過將MT用甲醛作連結(jié)劑連結(jié)到牛血清白蛋白上(BSA),采用皮下多點(diǎn)注射免疫小鼠得到了高效價,高親和力,較好特異性的抗MT單克隆抗體,最后獲得了5株單克隆細(xì)胞株,都能分泌針對MT的特異性抗體,建立了選擇性基團(tuán)免疫分析法,用制備的抗體測定了人血清中MT的含量,作了MT的抑制標(biāo)準(zhǔn)曲線,其抑制范圍從50pg—