全眼球深低溫冷凍保存后角膜內(nèi)皮細(xì)胞活性的評價.pdf

1、中文摘要前言隨著角膜移植手術(shù)的發(fā)展，角膜保存技術(shù)也逐漸改進(jìn)。傳統(tǒng)的`49C濕房全眼球保存法，具有簡便、價廉等優(yōu)點(diǎn)，但保存時間短，一般定為24小時之內(nèi)移植。深低溫冷凍保存法雖然能長期保存角膜內(nèi)皮細(xì)胞活性，但由于是采用游離角膜片進(jìn)行保存，內(nèi)皮細(xì)胞直接暴露，容易受各種機(jī)械因素和理化因素的損傷，而且操作技術(shù)復(fù)雜，植片不易取材，儀器、設(shè)備也非常昂貴，不宜廣泛開展。我們利用現(xiàn)有設(shè)備和條件，設(shè)計了兩種簡單經(jīng)濟(jì)的全眼球深低溫冷凍保存法，將全眼球保存法所

2、具有的操作簡單、取植片容易的優(yōu)點(diǎn)與深低溫保存法所具有的保存期長的優(yōu)點(diǎn)結(jié)合起來，用以長期保存角膜刁本實(shí)驗(yàn)通過觀察比較用這兩種方法保存不同時間的兔眼角膜厚度的變化及內(nèi)皮細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變來評價保存角膜內(nèi)皮細(xì)胞的活性。材料和方法‘一、動物:健康家兔30只，空氣栓塞處死后充四摘除雙眼球，經(jīng)檢查眼前節(jié)正常。60只眼球隨機(jī)分為兩個組，進(jìn)行不同處理。每組再隨機(jī)分為3個小組，分別保存7天、30天、60天。二、全眼球深低溫冷凍保存法:1.前房注氣組:冷凍過

3、程:眼球摘除后，用5號針頭從角膜緣進(jìn)人前房，抽出房水，注人0.2一0.3ml消毒空氣，保持正常眼壓(指測眼壓Tn)。將眼球角膜朝上放人塑料膠卷盒內(nèi)，封口后放人40C30分鐘，再分析。角膜內(nèi)皮細(xì)胞存活率采用xZ檢驗(yàn)。結(jié)果一、角膜中央厚度:結(jié)果見表to二、角膜內(nèi)皮細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu):電鏡下兩種方法保存的眼球，其角膜內(nèi)皮細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)改變有很大差別，但同一種方法保存不同時間的眼球，其角膜內(nèi)皮細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)改變基本相似(見圖234567910111

4、21314)。三、角膜內(nèi)皮細(xì)胞活性染色:前房注氣組顯示細(xì)胞廣泛破壞(見圖161718)，測不到角膜內(nèi)皮細(xì)胞存活率。前房注DMSO組的角膜內(nèi)皮細(xì)胞大小均勻，邊界清楚，可見范圍不等的藍(lán)染細(xì)胞(見圖192021)，保存7天、30天、60天后角膜內(nèi)皮細(xì)胞存活率分別為(88.0土6.3)%(84.8土6.6)%(86.1土5.7)%，無顯著差異(p0.05)。同一種方法不同保存時間的角膜內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)大致相同。討論由于深低溫冷凍法理論上可無限期保存

5、角膜內(nèi)皮細(xì)胞活性，最大限度地利用角膜材料，因而成為人們研究的理想方法。60年代中期，美國的CapelaKaufrnan和Robbins及英國的0Neil和Mueler相互獨(dú)立地發(fā)展出兩種極為相似的角膜一196℃深低溫保存法，其中尤以K一C法受到廣泛重視，但由于該法采用游離角膜片保存，內(nèi)皮細(xì)胞容易受損，且操作過程復(fù)雜、設(shè)備昂貴，一直未能普及。80年代以后人們又探索用玻璃化低溫保存法保存角膜，但由于存在高濃度冷凍保護(hù)劑對細(xì)胞的毒性、快速降溫