深低溫全眼球活性保存角膜的實驗研究.pdf

1、研究背景：角膜深低溫保存技術是Capella等于1965年創(chuàng)立的單純角膜組織保存方法。該方法可使角膜內(nèi)皮細胞長期處于“休眠狀態(tài)”，保存期間內(nèi)皮細胞活性不隨時間延長而減弱。4℃濕房保存是一種簡便的全眼球保存方法，它不易污染，便于運送和取材，但角膜內(nèi)皮細胞活性保存時間短。將兩者優(yōu)點結合起來，探索一種既簡便經(jīng)濟，又確實有效的長期深低溫全眼球活性保存角膜方法，以促進眼庫保存技術的發(fā)展。 目的：探索全眼球深低溫活性保存角膜的最佳模式，研究

2、影響深低溫全眼球保存法的角膜內(nèi)皮細胞活性的因素。 方法：根據(jù)深低溫冷凍保存過程中前房內(nèi)注入二甲基亞砜(DMSO)的方式，降溫速率及復溫條件的不同，將80只成年純種新西蘭兔眼球隨機分為8組，冷凍保存時間30天。另取10只新鮮兔眼做對照。通過角膜內(nèi)皮細胞活性染色方法評定各組角膜內(nèi)皮細胞存活率(ESR)及光鏡下內(nèi)皮細胞形態(tài)，優(yōu)選出最佳保存方法。將優(yōu)選組角膜與對照組同時進行電鏡檢查及琥珀酸脫氫酶(SDH)組織細胞化學染色，對比觀察兩組細

3、胞的超微結構及酶活性。 結果：評定出角膜內(nèi)皮細胞存活率最高組，為最佳凍存組，其方法如下：抽空房水，注入7.5﹪(V/V)DMS0，4℃冰箱內(nèi)冷平衡30min，其間每隔15min抽出前房內(nèi)保護液后再次注入7.5﹪DMSO，共反復2次。再分段降溫，-30℃30min，-80℃30min，最后將全眼球移入-196℃液氮中保存；40℃水浴中快速復溫。該組角膜內(nèi)皮細胞存活率平均為87.53﹪，與對照組(98.20﹪)比較，結果相近，符合臨