肌腱組織的深低溫保存研究.pdf

1、前言： 選用新型冷凍保護(hù)試劑配方(CryoprotectiveAgent CPA)對(duì)肌腱組織進(jìn)行玻璃化冷凍保存研究，考察不同冷凍保存方法對(duì)肌腱細(xì)胞細(xì)胞形態(tài)、組織結(jié)構(gòu)及生物力學(xué)性能影響的影響，研究不同時(shí)段自體及異體移植肌腱大體及組織形態(tài)學(xué)差異，探討玻璃化冷凍保存肌腱作為異體移植材料的可行性。 方法： 1、按預(yù)試驗(yàn)篩選出來(lái)的玻璃化保護(hù)劑保存肌腱，在液氮中保存2周以上，做為玻璃化組?！皟刹椒ā鄙畹蜏乩鋬霰４婕‰?，程控降

2、溫儀控制逐步降溫致-50℃，維持40分鐘后投入液氮，冷凍保存2周以上，做為”兩步法”深低溫組，新鮮肌腱取材后4小時(shí)內(nèi)完成體外檢測(cè)，做為新鮮肌腱組。電鏡觀察不同組間肌腱組織形態(tài)學(xué)差異，Instron-5865力學(xué)材料試驗(yàn)機(jī)測(cè)試不同組間肌腱生物力學(xué)差異。 2、術(shù)后2周、4周、8周無(wú)菌條件下取出植入的玻璃化保存肌腱，行HE染色及MSSON三色染色，觀察肌腱愈合情況，并與相對(duì)應(yīng)的不同移植時(shí)期自體肌腱及“兩步法”深低溫冷凍保存肌腱進(jìn)行比較

3、。 結(jié)果： 1、電鏡觀察結(jié)果顯示：玻璃化保存法對(duì)肌腱細(xì)胞和膠原纖維結(jié)構(gòu)損傷輕微，而“兩步法”深低溫冷凍保存法則對(duì)肌腱細(xì)胞和膠原纖維結(jié)構(gòu)損傷較重，尤其以肌腱細(xì)胞為重； 2、生物力學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示：肌腱破壞荷載峰值：新鮮肌腱組與玻璃化保存組及”兩步法”深低溫冷凍保存組均有顯著差異(F=9.222，p=0.002)，玻璃化保存組與”兩步法”深低溫冷凍保存組無(wú)顯著差異(p=0.256)；最大載荷拉伸位移：新鮮肌腱組與玻璃化

4、保存組及”兩步法”深低溫冷凍保存組三組間均無(wú)顯著差異(F=3.288，p=0.065)；楊氏彈性模量：新鮮肌腱組與玻璃化保存組及“兩步法”深低溫冷凍保存組均有顯著差異(F=7.368，p=0.006)，玻璃化保存組與”兩步法"深低溫冷凍保存組無(wú)顯著性差異(p=0.577)。 3、不同時(shí)段肌腱移植試驗(yàn)結(jié)果顯示：新鮮自體肌腱移植后2周時(shí)，肌腱細(xì)胞明顯減少，吻合口部可見炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，吻合口內(nèi)有較多血管長(zhǎng)入，4周時(shí)肌腱細(xì)胞基本消失，粗大

5、膠原被細(xì)膠原取代，細(xì)膠原纖維趨向于連接成束，吻合口部粘連較重，8周時(shí)部分細(xì)膠原纖維連結(jié)成束，由四周向中心逐漸替代細(xì)膠原纖維，移植肌腱內(nèi)血管逐漸減少消失，新的纖維排列稍欠規(guī)整。玻璃化異體肌腱吻合口部的愈合與膠原的替代進(jìn)程較慢，局部粘連也稍重，替代后的膠原纖維排列也較自體組欠規(guī)整?！皟刹椒ā鄙畹蜏乩鋬黾‰斓奶娲^程較新鮮肌腱組與玻璃化組更慢，局部粘連也更重，替代后的膠原結(jié)構(gòu)也更差。通過三組肌腱移植后愈合進(jìn)程的動(dòng)態(tài)觀察，可以看出新鮮自體肌腱移

6、植效果優(yōu)于玻璃化異體肌腱，而玻璃化異體肌腱又優(yōu)于”兩步法”深低溫冷凍異體肌腱。 結(jié)論： 玻璃化法保存的肌腱具有良好的細(xì)胞結(jié)構(gòu)和組織形態(tài)，體外檢測(cè)力學(xué)性能結(jié)果顯示，玻璃化法保存的肌腱比正常肌腱稍差，比“兩步法”深低溫保存肌腱稍好，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。將自體肌腱、玻璃化保存肌腱、“兩步法”深低溫冷凍保存肌腱進(jìn)行體內(nèi)移植，發(fā)現(xiàn)自體肌腱、玻璃化肌腱與“兩步法”深低溫保存肌腱均存在不同程度炎癥反應(yīng)，但不影響肌腱的愈合與重建，玻璃化法可