H2S對(duì)高糖誘導(dǎo)人腹膜間皮細(xì)胞氧化應(yīng)激的影響.pdf

1、【目的】
　　觀察高糖環(huán)境對(duì)人腹膜間皮細(xì)胞（HPMCs）的損傷作用以及高糖環(huán)境對(duì)內(nèi)源性硫化氫（H2S）分泌的影響并探討其可能的機(jī)制；進(jìn)一步觀察外源性 H2S對(duì)高糖環(huán)境誘導(dǎo)人腹膜間皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用并探討其可能的機(jī)制。
　　【方法】
　　體外培養(yǎng)人腹膜間皮細(xì)胞株HMrSV5細(xì)胞，用4.25％D-葡萄糖（高糖）、4.25%甘露醇和5×10-5、10-4、5×10-4、10-3和5×10-3 mol/L的外源性H2S供體硫

2、化氫鈉（NaHS）處理人腹膜間皮細(xì)胞株HMrSV5細(xì)胞24小時(shí)。采用四甲基偶氮唑鹽（MTT）比色法檢測(cè)細(xì)胞活力。采用分光光度法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液上清中乳酸脫氫酶（LDH）水平和細(xì)胞培養(yǎng)液上清中 H2S濃度。采用雙抗體夾心法測(cè)定細(xì)胞中總抗氧化力（T-AOC）的水平；采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的活性氧（ROS）水平；采用分光光度法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）的活性；采用ELISA法測(cè)定細(xì)胞中還原型谷胱甘肽（GSH）的水

3、平。采用實(shí)時(shí)定量PCR和Western Blot分別檢測(cè)胱硫醚γ裂解酶（CSE）和胱硫醚β合成酶（CBS）mRNA和蛋白的表達(dá)。
　　【結(jié)果】
　　（1）與對(duì)照組比較，高糖組HMrSV5細(xì)胞活力顯著降低，細(xì)胞培養(yǎng)液中LDH水平的顯著增加。
　　（2）與對(duì)照組比較，高糖（4.25%D-葡萄糖）顯著降低了HMrSV5細(xì)胞培養(yǎng)液上清中H2S濃度；高糖顯著下調(diào)了HMrSV5細(xì)胞中CSE mRNA和蛋白的表達(dá)。高糖處理雖然CBS

4、 mRNA和蛋白的表達(dá)有所降低，但是差異沒(méi)有顯著性。
　?。?）與對(duì)照組比較，高糖組細(xì)胞內(nèi)ROS水平和MDA含量顯著增加，而細(xì)胞內(nèi)T-AOC水平、SOD的活性和GSH水平顯著降低。
　?。?）與高糖組比較，5×10-4、10-3和5×10-3 mol/L的NaHS顯著抑制了高糖誘導(dǎo)的HMrSV5細(xì)胞活力的降低和細(xì)胞培養(yǎng)液中LDH水平的增加。
　?。?）與高糖組比較，10-3 mol/L的NaHS顯著降低了細(xì)胞內(nèi)ROS水