寧夏枸杞總黃酮對(duì)高糖誘導(dǎo)氧化應(yīng)激損傷保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的：體外實(shí)驗(yàn)明確寧夏枸杞總黃酮(TFLB)對(duì)高糖（HG）誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）氧化應(yīng)激損傷模型的保護(hù)作用；體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究 TFLB對(duì)鏈脲佐菌素（STZ）誘導(dǎo)建立糖尿病（DM）大鼠損傷模型的保護(hù)作用；為初步探討TFLB對(duì)氧化應(yīng)激損傷保護(hù)作用的分子機(jī)制做一些基礎(chǔ)研究。
　　方法：
　　1.體外培養(yǎng)HUVEC，采用HG誘導(dǎo)建立氧化應(yīng)激損傷模型,實(shí)驗(yàn)分為正常對(duì)照組、HG損傷模型組、枸杞黃酮保護(hù)組（100、200、400

2、mg·L-1）、陽性對(duì)照組（維生素 C）。以MTT法測定細(xì)胞存活率、試劑盒測定細(xì)胞中乳酸脫氫酶（LDH）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、一氧化氮（NO）、一氧化氮合酶（NOS）釋放量及活性的變化；以酶聯(lián)免疫分析測定(ELISA)法測定人血管性血友病因子(vWF)、人可溶性血栓調(diào)節(jié)蛋白(sTM)、人可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體（sEPCR）,觀察TFLB對(duì)HG誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用。
　　2.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)采用STZ

3、誘導(dǎo)建立DM大鼠模型的方法，將成模的DM大鼠隨機(jī)分為DM模型組和TFLB干預(yù)組。干預(yù)組大鼠TFLB灌胃4周，正常對(duì)照組及DM模型組大鼠予以等量生理鹽水灌胃，每兩周測空腹血糖一次。灌胃滿4周，尾靜脈采血測空腹血糖后，將大鼠麻醉，胸腔采血，測定血脂的變化；ELISA法測定大鼠 vWF、sTM、sEPCR變化；摘取胰腺、主動(dòng)脈組織進(jìn)行 HE染色和免疫組化，觀察TFLB對(duì)DM大鼠臟器超微結(jié)構(gòu)的影響及病理生理變化的改善功效。
　　結(jié)果：

4、r>　　1. TFLB對(duì)HG誘導(dǎo)建立HUVEC氧化應(yīng)激損傷模型的保護(hù)作用（體外實(shí)驗(yàn)）。(1)成功建立了HG誘導(dǎo)的HUVEC損傷模型，確定了HG的造模濃度為40mmol L-1，損傷時(shí)間為48小時(shí)。(2) TFLB干預(yù)后，與HG損傷模型組相比較，枸杞黃酮干預(yù)組MDA釋放量明顯降低、LDH釋放量及活性下降，SOD的活性明顯增高，NO、NOS生成量及活性明顯增高，具有顯著性差異（P<0.05，P<0.01），在一定濃度范圍內(nèi)與TFLB呈劑量依

5、賴性關(guān)系。（3）TFLB干預(yù)后，與HG損傷模型組相比較，枸杞黃酮干預(yù)組 sTM含量呈現(xiàn)下降趨勢；各枸杞黃酮干預(yù)組的vWF、、sEPCR含量明顯下降，差異具有顯著性（P<0.05，P<0.01）。
　　2．TFLB對(duì)STZ誘導(dǎo)建立糖尿?。―M）大鼠損傷模型保護(hù)作用（體內(nèi)實(shí)驗(yàn)）。(1) TFLB干預(yù)后可以延緩、推遲血糖升高的進(jìn)程，對(duì)血脂有明顯降低趨勢。(2) TFLB干預(yù)后，與DM模型組相比較，各TFLB干預(yù)組vWF、sTM、sEPC

6、R含量均呈下降趨勢，差異具有顯著性（P<0.05，P<0.01）。(3) TFLB干預(yù)后，與DM模型組相比較，隨TFLB劑量的升高，大鼠胰島數(shù)量及島內(nèi)分泌細(xì)胞數(shù)有所增多，細(xì)胞排列相對(duì)均勻規(guī)整，胰島結(jié)構(gòu)、形態(tài)基本趨于正常，細(xì)胞空泡變性相對(duì)較少。(4) TFLB干預(yù)后，與DM模型組相比較，低劑量TFLB干預(yù)組大鼠主動(dòng)脈內(nèi)膜仍見明顯增厚,且有山巒樣突起,血管形態(tài)改變，粗細(xì)不均，部分可見斑塊，外膜有輕度損傷，內(nèi)皮細(xì)胞增生,排列仍不規(guī)整；高劑量T

7、FLB干預(yù)組大鼠主動(dòng)脈內(nèi)膜有輕度增厚,內(nèi)皮細(xì)胞輕度增生、排列尚規(guī)整，外膜未見明顯損傷。
　　結(jié)論：
　　1. TFLB對(duì)HG誘導(dǎo)的HUVEC損傷模型干預(yù)后，提高了HUVEC中抗氧化酶（SOD）的活性，增加NO、NOS的釋放量及活性，降低了MDA和LDH的釋放量，下調(diào)了血管內(nèi)皮功能相關(guān)因子vWF、sTM、sEPCR的含量，實(shí)現(xiàn)對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用，初步作用機(jī)制可能與寧夏枸杞總黃酮抗自由基，保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞線粒體，減輕高糖所致的