毛蕊異黃酮葡糖苷對(duì)TAA致BRL-3A細(xì)胞氧化應(yīng)激的保護(hù)作用研究.pdf

1、目的：探討毛蕊異黃酮葡糖苷（Calycosin-7-O-β-D-glucopyranoside，CG）對(duì)硫代乙酰胺（TAA）致BRL-3A細(xì)胞氧化應(yīng)激的保護(hù)作用。
　　方法：以BRL-3A細(xì)胞為研究對(duì)象，通過(guò)TAA（0.18mol/L）損傷BRL-3A細(xì)胞2h建立氧化應(yīng)激模型。用不同濃度的CG對(duì)細(xì)胞進(jìn)行預(yù)處理（TAA損傷前12h加藥），用四甲基偶氮唑鹽（MTT）法檢測(cè)細(xì)胞存活率，試驗(yàn)設(shè)定空白對(duì)照組（N組）、氧化損傷組（TAA）組、

2、低濃度（10mg/L）CG組（C1組）、中濃度（20mg/L）CG組（C2組）、高濃度（40mg/L）CG組（C3組）、聯(lián)苯雙酯（DDB）陽(yáng)性對(duì)照組（PC組）。微板法檢測(cè)細(xì)胞上清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT/GPT）和天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST/GOT）活力；微板法、比色法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)總抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）活力、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）活力、過(guò)氧化氫酶（CAT）活力及丙二醛（MDA）含量；熒光顯微鏡

3、觀察并使用熒光酶標(biāo)儀和流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）含量的變化；紫外分光光度計(jì)法檢測(cè)肝微粒體（microsome）中CYP450和細(xì)胞色素b5含量以及CYP2E1活性；Real-time PCR法檢測(cè)細(xì)胞CYP2E1mRNA的相對(duì)表達(dá)量；Western Blot法檢測(cè)細(xì)胞CYP2E1蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果:當(dāng)TAA濃度為0.18mol/L時(shí)，BRL-3A細(xì)胞存活率約為50％。TAA誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激導(dǎo)致BRL-3A細(xì)胞存活率、

4、抗氧化能力的降低，轉(zhuǎn)氨酶活性、細(xì)胞內(nèi)ROS水平、CYP2E1 mRNA的相對(duì)表達(dá)量和蛋白表達(dá)量升高。與TAA組相比，CG預(yù)處理組（10mg/L、20mg/L、40mg/L）不同程度地升高細(xì)胞存活率、抗氧化能力，降低轉(zhuǎn)氨酶活性、細(xì)胞內(nèi)ROS水平、CYP2E1 mRNA的相對(duì)表達(dá)量和蛋白表達(dá)量。其中，以CG濃度為40mg/L時(shí)，保護(hù)效果最佳。
　　結(jié)論：CG對(duì)TAA致BRL-3A細(xì)胞的氧化應(yīng)激具有保護(hù)作用，使TAA致細(xì)胞氧化應(yīng)激狀態(tài)得