海帶提取物對百草枯誘導(dǎo)秀麗線蟲氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用研究.pdf

1、活性氧(reactiveoxygenspecies,ROS)是機(jī)體正常代謝的中間產(chǎn)物,有氧生物會不可避免地暴露在ROS環(huán)境中。正常生命體能夠依靠機(jī)體內(nèi)的抗氧化系統(tǒng)來維持活性氧的動態(tài)平衡。當(dāng)機(jī)體受到各種刺激時(shí),如饑餓、電磁輻射、高原低氧等,機(jī)體內(nèi)的氧化和還原失去平衡而產(chǎn)生大量活性氧,一旦超出了機(jī)體能承受的抗氧化能力,活性氧就直接攻擊生物大分子如蛋白質(zhì)、脂肪及核酸等,導(dǎo)致機(jī)體組織的氧化應(yīng)激(oxidativestress)損傷,誘發(fā)神經(jīng)退行

2、性疾病、腫瘤、炎癥等多種疾病。因此,清除機(jī)體中多余活性氧是防治此類疾病的重要策略。研究發(fā)現(xiàn),一些天然植物提取物具有潛在的抗氧化活性,可成為治療此類疾病的候選藥物。本文選擇海帶提取物等幾種天然植物提取物進(jìn)行體外抗氧化活性評價(jià),并且選擇海帶提取物在秀麗線蟲中進(jìn)行抗氧化活性評價(jià),旨在為活性氧損傷相關(guān)疾病提供新的干預(yù)策略。主要研究結(jié)果如下:
　　一、海帶提取物等四種天然提取物的抗氧化/還原能力和清除自由基活性比較
　　目的:體外實(shí)驗(yàn)

3、比較海帶提取物(LaminariajaponicaExtract,ELJ)、猴頭菇多糖(HericiumerinaceusPolysaccharides,HEP)、馬尾藻多糖(SargassumpallidumPolysaccharides,SPP)、牛膝糖肽(AchyranthesbidentataGlycopeptide,ABG)四種天然植物提取物的總抗氧化能力、還原能力、清除超氧陰離子能力的差異,尋找體外抗氧化活性較強(qiáng)的植物提取物

4、。
　　方法:總抗氧化能力測定采用FRAP法,其原理是酸性條件下抗氧化物可以還原Ferric-tripyridyltriazine(Fe3+-TPTZ)產(chǎn)生藍(lán)色的Fe2+-TPTZ,隨后在最高吸收峰593nm處測定藍(lán)色的Fe2+-TPTZ即可獲得樣品中的總抗氧化能力。還原能力測定采用鐵氰化鉀還原法,其原理是通過測定待測抗氧化劑轉(zhuǎn)化Fe3+為Fe2+的能力得到待測抗氧化劑的還原能力。清除超氧陰離子采用的檢測方法是NBT-光還原法進(jìn)行

5、,該反應(yīng)中VB2和EDTA在光照下發(fā)生反應(yīng),產(chǎn)生超氧陰離子,超氧陰離子與NBT發(fā)生反應(yīng),在560nm處有最大吸收峰。在反應(yīng)體系中加入植物提取物,若植物提取物與超氧陰離子反應(yīng),則會阻止超氧陰離子與NBT反應(yīng),在560nm處吸收峰會發(fā)生變化,根據(jù)植物提取物與超氧陰離子反應(yīng)的程度即可計(jì)算植物提取物清除超氧陰離子活性能力。
　　結(jié)果:海帶提取物(ELJ)、猴頭菇多糖(HEP)、馬尾藻多糖(SPP)、牛膝糖肽(ABG)四種天然植物提取物的總

6、抗氧化能力由強(qiáng)到弱依次為ELJ、HEP、SPP、ABG。還原能力由強(qiáng)到弱依次為HEP、ELJ、ABG、SPP。清除超氧陰離子活性由強(qiáng)到弱依次為ELJ、HEP、ABG、SPP。綜合比較,可見ELJ具有較強(qiáng)的體外抗氧化活性,后續(xù)針對該種提取物進(jìn)行深入研究。
　　二、海帶提取物對百草枯誘導(dǎo)秀麗線蟲氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用研究
　　目的:建立秀麗線蟲百草枯(PQ)氧化應(yīng)激損傷模型,選擇體外抗氧化活性較強(qiáng)的海帶提取物(ELJ)進(jìn)行秀麗線

7、蟲體內(nèi)抗氧化活性評價(jià)實(shí)驗(yàn)。
　　方法:利用秀麗線蟲制備PQ氧化應(yīng)激損傷模型。利用海帶提取物干預(yù)該模型秀麗線蟲,通過體長(bodysize)、成蟲率、產(chǎn)卵等指標(biāo)進(jìn)行抗氧化效果評價(jià);通過檢測ROS水平、凋亡及氧化應(yīng)激相關(guān)差異基因的表達(dá)來研究海帶提取物保護(hù)機(jī)制。結(jié)果:海帶提取物能恢復(fù)線蟲PQ損傷后的體長變短,提高線蟲成蟲率、產(chǎn)卵率,降低線蟲體內(nèi)的ROS水平,減少線蟲生殖腺細(xì)胞的凋亡數(shù)目,并且能通過影響體內(nèi)抗氧化基因daf/sod發(fā)揮抗氧

8、化作用。
　　三、不同狀態(tài)大腸桿菌OP50對秀麗線蟲生長發(fā)育的影響
　　目的:比較不同方式滅活處理的食物菌——大腸桿菌OP50對線蟲生長發(fā)育的差異,尋找合適的線蟲食物菌的滅活方法,避免活體OP50菌對實(shí)驗(yàn)的干擾。
　　方法:根據(jù)實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有條件,選擇65℃熱滅活和鈷60γ射線照射兩種滅活的線蟲食物菌的方式分別和正?；罹鲗φ?比較各組線蟲生長發(fā)育情況,體長差異,產(chǎn)卵數(shù)量變化,以及不同處理的食物菌的琥珀酸脫氫酶的活性變化。

9、
　　結(jié)果:用兩種方式滅活的OP50菌飼喂線蟲后,線蟲的生長發(fā)育出現(xiàn)顯著差異,熱滅活的菌導(dǎo)致線蟲生長速度降低,而鈷60γ射線照射的菌對線蟲生長發(fā)育沒有影響;噻唑藍(lán)(3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide,MTT)結(jié)果提示這種差異可能是由于鈷60γ射線照射OP50后,蛋白以及其一些酶的活性出現(xiàn)變化的緣故。同時(shí),我們還發(fā)現(xiàn)對OP50使用紫外線照射和超