紫檀芪對(duì)百草枯誘導(dǎo)肺纖維化的保護(hù)作用及機(jī)制.pdf

1、研究背景：百草枯(paraquat，PQ)中毒可導(dǎo)致肺部損傷，該過(guò)程可明確劃分為兩個(gè)階段:急性肺損傷階段與肺纖維化階段。PQ通過(guò)誘導(dǎo)氧化應(yīng)激、炎癥以及纖維反應(yīng)產(chǎn)生毒性。PQ中毒主要機(jī)制是氧化還原反應(yīng)和活性氧(reactive oxygen species，ROS)的產(chǎn)生。
　　Sirt1（sirtuin type1）是一種重要的細(xì)胞生存蛋白，與氧化應(yīng)激有關(guān)。ROS水平增加可抑制Sirt1活性，這是因?yàn)镽OS能夠氧化修飾Sirt1半

2、胱氨酸殘基。Sirt1的過(guò)表達(dá)能夠誘導(dǎo)抗氧化基因表達(dá)，進(jìn)而起到抗氧化應(yīng)激作用。
　　紫檀芪(pterostilbene，PTS)在葡萄、藍(lán)莓和紫檀木中被發(fā)現(xiàn)，具有止痛、抗衰老、抗癌、抗炎、抗氧化和抗增殖的藥理作用。
　　本實(shí)驗(yàn)分為兩個(gè)部分:第一部分旨在研究Sirt1是否與PQ誘導(dǎo)的急性肺損傷與肺纖維化有關(guān);第二部分旨在研究紫檀芪能否通過(guò)抑制ROS的產(chǎn)生和調(diào)節(jié)Sirt1的表達(dá)而對(duì)PQ誘導(dǎo)的肺部纖維化起到保護(hù)作用。
　　方

3、法：第一部分實(shí)驗(yàn):腹腔注射PQ30 mg/kg，構(gòu)建C57BL/6小鼠（5-8周齡）急性肺損傷模型，實(shí)驗(yàn)分為正常對(duì)照組和PQ組。單次注射PQ8h后麻醉動(dòng)物進(jìn)行支氣管肺泡灌洗，取支氣管肺泡灌洗液(BALF)檢測(cè)灌洗液中細(xì)胞總數(shù)、總蛋白濃度，采用ELISA試劑盒檢測(cè)BALF中IL-6與TNF-α水平;取肺組織，HE染色觀察組織形態(tài)學(xué)的變化，DHE染色檢測(cè)ROS水平，TUNEL染色與Caspase-3活性檢測(cè)細(xì)胞凋亡狀況，Western Bl

4、ot檢測(cè)組織中Sirt1的蛋白表達(dá)。腹腔注射PQ20 mg/kg，構(gòu)建C57BL/6小鼠（5-8周齡）肺纖維化模型，實(shí)驗(yàn)分為正常對(duì)照組和PQ組。單次注射21天后造模結(jié)束，處理方法及檢測(cè)指標(biāo)同上，并做Masson染色檢測(cè)膠原沉積。
　　第二部分實(shí)驗(yàn):紫檀芪干預(yù)實(shí)驗(yàn)分為正常對(duì)照組、模型組、溶媒組、紫檀芪低劑量組（PQ+PTS20 mg/kg）、紫檀芪高劑量組(PQ+PTS40 mg/kg)和紫檀芪組(PTS40 mg/kg)。單次腹腔

5、注射PQ20 mg/kg，隨后每日進(jìn)行紫檀芪灌胃，連續(xù)灌胃21天，麻醉動(dòng)物進(jìn)行支氣管肺泡灌洗并取肺組織，方法及檢測(cè)指標(biāo)與肺纖維化模型相同。
　　結(jié)果：
　　第一部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
　　1.與正常對(duì)照組相比，急性肺損傷小鼠肺組織中出現(xiàn)肺泡間隔增厚、肺泡斷裂和炎性細(xì)胞浸潤(rùn);肺纖維化小鼠肺組織中無(wú)功能的肺纖維組織逐漸代替正常的肺泡組織，肺泡出現(xiàn)萎陷、肺泡間隔增厚、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。Masson染色結(jié)果顯示肺纖維化肺組織出現(xiàn)膠原沉積。

6、
　　2.與正常對(duì)照組相比，急性肺損傷與肺纖維化小鼠BALF中細(xì)胞總數(shù)增多，總蛋白濃度增加，IL-6與TNF-α水平升高。
　　3.與正常對(duì)照組相比，急性肺損傷與肺纖維化小鼠肺組織Caspase-3活性顯著增強(qiáng)，TUNEL染色陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)增多。
　　4.與正常對(duì)照組相比，急性肺損傷與肺纖維化小鼠肺組織ROS水平升高。
　　5.與正常對(duì)照組相比，急性肺損傷與肺纖維化小鼠肺組織Sirt1蛋白表達(dá)降低。
　　6.與

7、正常對(duì)照組相比，急性肺損傷與肺纖維化小鼠BALF中IL-6與TNF-α水平升高。
　　第二部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
　　1.與PQ組相比，高劑量紫檀芪能夠減輕PQ對(duì)肺泡結(jié)構(gòu)的損傷，同時(shí)也減少膠原沉積。
　　2.與PQ組相比，高劑量紫檀芪能顯著減少BALF中細(xì)胞總數(shù)和總蛋白濃度。
　　3.與PQ組相比，高劑量紫檀芪可抑制肺組織Caspase-3活性，同時(shí)可使肺組織TUNEL染色陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)減少。
　　4.與PQ組相比，高