2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
已閱讀1頁,還剩64頁未讀 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領

文檔簡介

1、目的:構(gòu)建體外百草枯(paraquat,PQ)細胞纖維化模型,觀察PQ對II型肺泡上皮細胞(A549細胞)中解整合素-金屬蛋白酶17(a disintegrin and metalloproteinase-17,ADAM17)表達的影響和探討ADAM17在PQ中毒致肺纖維化中的作用。
  方法:
  1.建立細胞纖維化模型:1)體外培養(yǎng)A549細胞,將對數(shù)生長期的A549細胞分為正常組、PQ組(50、100、200、400、

2、600、800、1000umol/L),分別作用12h、24h、36h、48h,應用CCK-8法檢測細胞存活率,篩選出理想的PQ濃度(50、100、200umol/L)和作用時間(12h、24h、48h)。2)將對數(shù)生長期的A549細胞分為正常組、PQ組(50、100、200umol/L),作用24h,應用倒置相差顯微鏡觀察細胞形態(tài),采用酶聯(lián)免疫吸附法(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)測定

3、各組纖維化標志物I型膠原(type I collagen,Col I)和纖連蛋白(fibronectin,F(xiàn)N)的表達,以確認纖維化模型的成功。
  2.觀察ADAM17在本細胞模型中的表達:將A549細胞分為正常組、PQ組(PQ濃度50、100、200umol/L),作用12h、24h、48h,采用(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)、免疫細胞化學(im

4、munocytochemistry,ICC)及蛋白免疫印跡(Western Blot,WB)分別檢測ADAM17 mRNA和蛋白的表達。
  3.ADAM17在PQ中毒致肺纖維化中的作用探討:使用ADAM17抑制劑(tumor necrosis factor-αprocessing inhibitor-1,TAPI-1),初步探討ADAM17在PQ中毒細胞模型中的作用;以TAPI-1進行干預,將對數(shù)生長期的A549細胞分為正常組、

5、PQ組(200umol/L)、PQ+TAPI-1組(PQ200umol/L+TAPI-120umol/L),作用時間24h,RT-PCR、ICC及Western blot分別檢測ADAM17 mRNA及蛋白的表達情況,以CCK-8法檢測各組細胞活力,倒置相差顯微鏡觀察細胞形態(tài),ELISA測定各組Col I、FN的表達量。
  結(jié)果:
  1.隨著PQ濃度增加及作用時間延長,A549細胞活性呈下降趨勢(P<0.05),呈濃度和

6、時間依賴性。
  2.倒置顯微鏡下正常的A549細胞融合呈鋪路石樣生長,排列比較緊密,經(jīng)PQ誘導后細胞排列較松散,細胞間連接變疏松,部分細胞溶解、死亡。
  3.ELISA結(jié)果顯示,隨PQ濃度增加,Col I和FN表達增強(P<0.05),成功建立PQ誘導的細胞纖維化模型。
  4.百草枯細胞纖維化模型中有ADAM17的表達:1)ICC顯示,ADAM17在A549細胞胞漿表達,隨PQ濃度增加,黃色陽性顆粒沉積越多。2)

7、RT-PCR和Western blot表明,隨著PQ濃度增加,ADAM17 mRNA及蛋白水平表達明顯增加(P<0.05);隨著PQ作用時間延長,ADAM17 mRNA及蛋白水平表達增加(P<0.05),在24h達到高峰,呈一定時間依賴性。
  5.TAPI-1抑制ADAM17的表達和纖維化:1)ICC顯示, PQ+TAPI-1組細胞質(zhì)中黃色陽性顆粒的沉積較PQ組減少。2)RT-PCR及Western blot表明,PQ+TAPI

8、-1組較PQ組相比,ADAM17 mRNA及蛋白表達水平均下調(diào)(P<0.05)。3)CCK-8結(jié)果提示PQ+TAPI-1組細胞活力較PQ組有所改善(P<0.05)。4)顯微鏡下觀察 PQ+TAPI-1組細胞形態(tài)及細胞間隙介于正常組和PQ組之間,細胞溶解較PQ組減少。5)ELISA結(jié)果顯示,PQ+TAPI-1組較PQ組Col I和FN的表達下降(P<0.05)。
  結(jié)論:
  1.百草枯構(gòu)建體外A549細胞纖維化模型。

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論