耐頭孢西丁革蘭陰性桿菌高產(chǎn)AmpC酶發(fā)生率及耐藥相關(guān)基因和耐藥性研究.pdf

1、革蘭陰性桿菌是臨床常見致病菌或機(jī)會(huì)致病菌，也是院內(nèi)感染的重要病原菌，其耐藥性的變遷和多重耐藥的出現(xiàn)，給臨床治療帶來(lái)極大困難。革蘭陰性桿菌對(duì)β內(nèi)酰胺類抗生素耐藥的主要機(jī)制是產(chǎn)生AmpC酶、ESBLs等滅活抗生素。早期認(rèn)為AmpC酶是由染色體介導(dǎo)的，但二十世紀(jì)九十年代開始發(fā)現(xiàn)，AmpC酶也可由質(zhì)粒介導(dǎo)，可在不同菌種間水平傳播，并以每年1～2種新基因型的速度發(fā)展。因所使用抗生素種類和量的不同，各地流行的滅活酶和基因型互有差異，不同的滅活酶和不

2、同的基因型耐藥表型和流行特征也不相同。因此，了解不同地區(qū)耐藥基因的流行狀況，有助于監(jiān)控耐藥基因的擴(kuò)散以及為臨床抗生素的合理使用提供依據(jù)。 本研究通過收集2004年9月～2005年3月自南京軍區(qū)福州總醫(yī)院、福建省立醫(yī)院、解放軍476醫(yī)院、福州市第二醫(yī)院住院患者中分離的156株耐頭孢西丁無(wú)重復(fù)革蘭陰性桿菌，采用酶提取物頭孢西丁三維試驗(yàn)，檢測(cè)高產(chǎn)AmpC酶；ATB藥敏試驗(yàn)板和K-B法測(cè)定高產(chǎn)AmpC酶菌株對(duì)抗菌藥物的敏感性；質(zhì)粒轉(zhuǎn)化試

3、驗(yàn)和接合試驗(yàn)定位耐藥基因及觀察耐藥基因的水平轉(zhuǎn)移狀況；PCR擴(kuò)增AmpC酶、ESBLs、BSBL和qnr基因，擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行序列分析和網(wǎng)上比對(duì)，確定其基因型；用ERIC-PCR確定產(chǎn)酶株間的親緣關(guān)系。由此了解福州地區(qū)耐頭孢西丁革蘭陰性桿菌高產(chǎn)AmpC酶的發(fā)生率及耐藥相關(guān)基因的分布和耐藥性狀況。 研究結(jié)果顯示，156株菌中有38株高產(chǎn)AmpC酶，發(fā)生率為24．35％，分布于12種菌種中。其中大腸埃希氏菌、肺炎克雷伯菌、綠膿假單胞菌、

4、鮑氏不動(dòng)桿菌和陰溝腸桿菌具有較高的發(fā)生率，分別為29．3％、21．05％、6．7％、6／10、2／6。從2株肺炎克雷伯菌和5株大腸埃希菌中分別擴(kuò)增出質(zhì)粒介導(dǎo)的AmpC酶DHA-1型和CMY-2、CMY-22型基因。38株高產(chǎn)AmpC酶菌中，19株菌同時(shí)產(chǎn)ESBLs，SSBL菌的發(fā)生率為50％；25株菌帶有TEM．1型廣譜酶(其中l(wèi)株還帶有SHV-33型B一內(nèi)酰胺酶)；16株菌同時(shí)帶有2種或2種以上廣譜或(和)超廣譜B一內(nèi)酰胺酶。ESBL

5、s的基因型，除l株為TEM．144型外，其余均為CTX-M型，以CTX-M-14型占絕對(duì)優(yōu)勢(shì)。38株菌中未擴(kuò)增出qnr基因。7株確定AmpC酶基因型菌株中，篩選到4株轉(zhuǎn)化子：34株質(zhì)粒接合試驗(yàn)菌中，16株接合成功，成功率為47．06％。ERIC-PCR顯示，大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌和鮑曼不動(dòng)桿菌均有產(chǎn)酶株克隆在福州總醫(yī)院、福建省立醫(yī)院和解放軍476醫(yī)院內(nèi)傳播。高產(chǎn)AmpC酶菌株呈嚴(yán)重的多重耐藥，但對(duì)亞胺培南、美羅培南的敏感率尚達(dá)88％以

6、上。 由研究結(jié)果可得出結(jié)論，福州地區(qū)臨床分離株中存在質(zhì)粒介導(dǎo)的AmpC酶，流行的基因型以CMY-2、DHA。1型為主，ESBLs流行的基因型以CTX-M一14為主；耐頭孢西丁革蘭陰性桿菌高產(chǎn)AmpC酶發(fā)生率高，同時(shí)攜帶其它B一內(nèi)酰胺酶的發(fā)生率也高，菌種分布寬，耐藥性強(qiáng)，耐藥基因的水平傳播能力強(qiáng)。因此應(yīng)加強(qiáng)耐頭孢西丁革蘭陰性桿菌高產(chǎn)AmpC酶和其它B一內(nèi)酰胺酶的監(jiān)測(cè)及治療相關(guān)菌感染的研究，控制產(chǎn)酶株的蔓延；治療相關(guān)菌感染應(yīng)以亞胺培