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文檔簡介
1、β-內(nèi)酰胺類抗生素療效好而毒性小,是目前治療感染性疾病的重要藥物。該類藥物包括青霉素類、頭孢菌素類、碳青霉烯類等。但隨之而來細(xì)菌也很快就產(chǎn)生耐藥性。近年來,控制由多重耐藥革蘭陰性桿菌引起的醫(yī)院獲得性感染一直是各國醫(yī)學(xué)界所面臨的重要問題。 產(chǎn)生超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(Extended-spectrum a-lactamases ESBLs)是導(dǎo)致腸桿菌科細(xì)菌對第三代頭孢菌素耐藥的最常見機(jī)制。各地ESBLs的流行情況差異很大,各個國家和
2、地區(qū)產(chǎn)ESBLs菌株的發(fā)生率亦明顯不同。 銅綠假單胞菌是引起院內(nèi)感染最常見的革蘭陰性桿菌菌種之一。由于它具有先天的和后天獲得的耐藥性,常對多種不同類型的抗菌藥物高度耐藥,一旦感染,治療非常棘手,死亡率很高。 探索耐藥機(jī)制開發(fā)新的抗菌藥物是人類在與感染性疾病抗?fàn)庍^程中需要持續(xù)不斷研究的重要課題。 本研究首先分析了常規(guī)方法篩選產(chǎn)ESBLs的181株腸桿菌科細(xì)菌和75株銅綠假單胞菌對常用的10種抗菌藥物的敏感性,并通過
3、PCR-測序法檢測了這些菌株中ESBLs的基因型分布。結(jié)果顯示,產(chǎn)ESBLs腸桿菌科細(xì)菌對頭孢類和喹諾酮類的耐藥性均較高;含酶抑制劑的β-內(nèi)酰胺類敏感率較高:對碳青霉烯類全部敏感。銅綠假單胞菌對所用10種抗菌藥物的耐藥率都相當(dāng)高。最有效的藥物是美羅培南,但其抑菌率只有69.7%。 181株腸桿菌科細(xì)菌全部檢出ESBLs基因,經(jīng)測序證實(shí)以tem-1和ctx-m-3型為主,其中tem和ctx-m同時陽性的有82株,有4株菌tem基因
4、陽性同時還檢出oxa-1群基因,其它基因型均未檢出。75株銅綠假單胞菌中40株檢測到ESBLs基因。tem-1是最常見的,有20株菌陽性:其次是oxa-10,13株陽性。沒有檢測到shv、ctx-m和ges基因。 銅綠假單胞菌中ESBLs并非最重要的β-內(nèi)酰胺酶,所以對75株銅綠假單胞菌,我們還采用用頭孢西丁敏感試驗、三聯(lián)紙片試驗和改良三維試驗檢測AmpC酶:用抑制劑增效試驗和雙紙片協(xié)同試驗檢測金屬β-內(nèi)酰胺酶。結(jié)果AmpC酶陽
5、性的有40株,金屬酶陽性為38株。與ESBLs綜合來看,75株菌中有11株菌同時檢測到ESBLs、AmpC和MBLS,33株同時兩類酶陽性。 除β-內(nèi)酰胺酶外,外膜通透性降低與多藥外排泵的產(chǎn)生在銅綠假單胞菌碳青霉烯類耐藥中有重要的作用。故對30株碳青霉烯類耐藥株用定量RT-PCR檢測其OprD和四種多藥耐藥泵基因的表達(dá)情況。結(jié)果30株碳青霉烯類耐藥的銅綠假單胞菌中14株有耐藥泵基因表達(dá)異常,12株OprD表達(dá)異常。結(jié)合第一部分中
6、p.內(nèi)酰胺酶的分析,一株細(xì)菌中可同時存在耐藥泵、OprD基因表達(dá)異常及產(chǎn)多種p.內(nèi)酰胺酶,由此可見銅綠假單胞菌的耐藥機(jī)制非常復(fù)雜。這些不同的耐藥機(jī)制間相互作用、相互影響導(dǎo)致產(chǎn)生不同的耐藥表型。與實(shí)驗菌株相比,臨床株的耐藥機(jī)制錯綜復(fù)雜。一些耐藥機(jī)制在實(shí)驗株中表現(xiàn)出來的耐藥表型并不一定在臨床株中存在。比如實(shí)驗株中MexCD高表達(dá)導(dǎo)致對亞胺培南的高度敏感,而本研究中并沒有發(fā)現(xiàn)此種現(xiàn)象。通常對產(chǎn)AmpC酶的菌株主張選用頭孢吡肟治療,但本研究中8
7、株只產(chǎn)AmpC酶的菌株中就有4株都對頭孢吡肟耐藥。 綜上分析,盡管產(chǎn)ESBLs的腸桿菌科細(xì)菌對三、四代頭孢菌素耐藥性強(qiáng),但其對含酶抑制劑的藥物依然保持較高的敏感率,而且,全部菌株都對碳青霉烯類敏感。所以,對其感染我們依然有藥可用。但銅綠假單胞菌耐藥現(xiàn)象非常嚴(yán)重,美羅培南的抑菌率也只有69.7%。產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶是耐β-內(nèi)酰胺類藥物的主要機(jī)制之一;碳青霉烯類耐藥株中部分有泵基因或OprD的表達(dá)異常。一株細(xì)菌中可同時存在多種耐藥機(jī)制
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