革蘭陰性桿菌超廣譜β-內(nèi)酰胺酶的研究.pdf

1、產(chǎn)生超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(Extended-spectrum β-lactamases ESBLs)是導(dǎo)致腸桿菌科細(xì)菌對第三代頭孢菌素耐藥的最常見機(jī)制,ESBLs尤其在肺炎克雷伯菌和大腸埃希菌最為多見.大多數(shù)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶由廣譜酶TEM-1、2和SHV-1衍生而來,可以水解氧亞氨基頭孢菌素類和單環(huán)β-內(nèi)酰胺類抗生素.近年來,CTX-M型和OXA型ESBLs等非TEM型非SHV型ESBLs不斷增多.產(chǎn)ESBLs菌株主要引起醫(yī)院感染,已呈

2、世界流行,成為臨床治療的一大難題.產(chǎn)ESBLs菌可以發(fā)生垂直傳播(克隆傳播),也可以通過質(zhì)?；蜣D(zhuǎn)座子進(jìn)行產(chǎn)酶基因水平傳播.各地ESBLs的流行情況差異很大,各個國家和地區(qū)產(chǎn)ESBLs菌株的發(fā)生率亦明顯不同.國內(nèi)有關(guān)這方面的報道較少,尚缺乏系統(tǒng)的研究.為了了解華山醫(yī)院臨床分離大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌中產(chǎn)ESBLs菌株的流行情況、耐藥性以及酶的型別、產(chǎn)ESBLs菌株感染的臨床特性,我們進(jìn)行了以下六個方面的研究.第一部分 臨床分離大腸埃希菌和

3、肺炎克雷伯菌中產(chǎn)ESBLs菌株的檢測和基因型分析 第二部分 產(chǎn)ESBLs菌株接合子的ESBLs表型鑒定、質(zhì)粒分析、β-內(nèi)酰胺酶型別和等電測定 第三部分 TEM型β-內(nèi)酰胺酶全編碼基因的PCR擴(kuò)增、克隆、表達(dá)及序列分析 為了進(jìn)一步了解TEM型β-內(nèi)酰胺酶的具體型別和特性,我們對23株轉(zhuǎn)移接合子中的TEM型β-內(nèi)酰胺酶的全編碼基因進(jìn)行了PCR擴(kuò)增,將擴(kuò)增產(chǎn)物構(gòu)建入載體質(zhì)粒pHSG398、在E.coli K<,12>1037NAL<'R>La

4、c<'->中進(jìn)行表達(dá),并將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行序列分析.第四部分 SHV型β-內(nèi)酰胺酶全編碼基因的PCR擴(kuò)增、克隆、表達(dá)及序列分析 為了了解SHV型β-內(nèi)酰胺酶的具體型別和特性,我們對7株轉(zhuǎn)移接合子(供體菌為肺炎克雷伯菌)和3株臨床分離產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌中的SHV型β-內(nèi)酰胺酶的全編碼基因進(jìn)行了PCR擴(kuò)增,將擴(kuò)增產(chǎn)物克隆入載體質(zhì)粒pHSG398在E.coli K<,12>1037RIF<'R>Lac<'->中進(jìn)行表達(dá),并將PCR擴(kuò)增產(chǎn)