腸桿菌中產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶菌株的基因型分析.pdf

1、目的:腸桿菌科細(xì)菌成員龐大、最為常見,與人類疾病關(guān)系十分密切。腸桿菌科細(xì)菌對廣譜β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥的常見機(jī)制是產(chǎn)生超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(extended-spectrumβ-lactamases,ESBLs)。苷酸序列分析技術(shù)可更加準(zhǔn)確客觀地了解ESBLs基因亞型間的差異以及發(fā)現(xiàn)新的產(chǎn)ESBLs基因,本實(shí)驗(yàn)將運(yùn)用核苷酸序列分析技術(shù)了解武漢市第三醫(yī)院臨床分離的腸桿菌科細(xì)菌的ESBLs基因型及產(chǎn)ESBLs菌感染現(xiàn)狀,為臨床合理用藥以及延緩

2、耐藥控制措施方案的制定提供一定的理論參考。
　　 方法:收集武漢市三醫(yī)院2011年1月至2011年12月臨床分離的雙紙片協(xié)同初篩試驗(yàn)為陽性的產(chǎn)ESBLs腸桿菌科細(xì)菌,采用臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會推薦的標(biāo)準(zhǔn)紙片擴(kuò)散法表型確證試驗(yàn)(藥敏紙片頭孢他啶、頭孢他啶/克拉維酸和頭孢噻肟、頭孢噻肟/克拉維酸同時檢測ESBLs)確證ESBLs陽性菌,運(yùn)用引物設(shè)計軟件,在TEM、CTX-M型和SHV型耐藥基因保守區(qū)設(shè)計PCR擴(kuò)增的通用引物,提取待測菌

3、的DNA作為擴(kuò)增模板,對確證實(shí)驗(yàn)ESBLs陽性菌株進(jìn)行PCR擴(kuò)增,瓊脂糖凝膠電泳分離,回收純化PCR擴(kuò)增產(chǎn)物并進(jìn)行基因測序,將測序結(jié)果與NCBI數(shù)據(jù)庫進(jìn)行基因比對從而對ESBLs耐藥基因進(jìn)行分型。
　　 結(jié)果:本實(shí)驗(yàn)收集武漢市三醫(yī)院分離的333株ESBLs初篩試驗(yàn)陽性的腸桿菌科細(xì)菌主要來源于創(chuàng)面分泌物,占所有標(biāo)本的36.6％,其次為痰和尿液標(biāo)本。運(yùn)用紙片擴(kuò)散法表型確證試驗(yàn)確證ESBLs陽性菌283株,其中大腸埃希菌占67.1%,

4、肺炎克雷伯菌占2313%,奇異變形桿菌占3.5%,普通變形桿菌占2.2%,陰溝腸桿菌占3.9%。對紙片擴(kuò)散法表型確證試驗(yàn)確證為ESBLs陽性菌進(jìn)行PCR擴(kuò)增,77.39%(219/283)的細(xì)菌擴(kuò)增出ESBLs耐藥基因。CTX-M型占ESBLs陽性菌38.17%(108/283),TEM型占ESBLs陽性菌23.32%(66/283),15.90%(45/283)的細(xì)菌擴(kuò)增TEM型和CTX-M雙重耐藥基因,22.61%(64/283)的

5、ESBLs表型確證陽性菌株進(jìn)行PCR擴(kuò)增未發(fā)現(xiàn)陽性條帶。CTX-M-15和TEM-3是主要的耐藥基因亞型,其次是CTX-M-3和CTX-M-14群耐藥基因。未發(fā)現(xiàn)SHV型耐藥基因。
　　 結(jié)論:實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明紙片擴(kuò)散法表型確證試驗(yàn)與常規(guī)PCR擴(kuò)增試驗(yàn)陽性率一致性高于77.39%;通過武漢市三醫(yī)院2011年度ESBLs陽性菌全院科室分布統(tǒng)計得出ESBLs陽性菌檢出率最高的科室是燒傷科,占全院ESBLs陽性菌24.4%,該院最流行的E