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文檔簡介
1、目的:構建人類CD146基因的表達載體,研究其對乳腺癌細胞MDA-MB-231細胞侵襲、凋亡的影響。
方法:采用分子生物學方法構建人類CD146基因的表達載體,利用脂質體Lipofectamine2000轉染到乳腺癌細胞MDA-MB-231,于熒光顯微鏡下評價轉染效果,利用RT-PCR、Westernblot分別檢測基因CD146在mRNA、蛋白水平上的表達效果。采用MTT法檢測細胞在體外增殖的能力;流式細胞儀法FCM檢測
2、細胞的周期分布及凋亡水平的變化情況;Transwell實驗觀察細胞侵襲能力改變。
結果:酶切、測序結果均表明pEGFP-N1-CD146載體構建成功;RT-PCR、Westernblot結果顯示,與對照組相比,轉染細胞后,實驗組CD146mRNA和蛋白的水平表達均有增高(P＜0.05);增殖實驗結果顯示轉染后實驗組細胞增值能力較對照組細胞增高(P＜0.05);流式結果表明,與對照組相比,pEGFP-N1-CD146實驗組細
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