靶向Hiwi基因的siRNA干擾對誘導三陰乳腺癌MDa-MB-231細胞凋亡的影響.pdf

1、[目的]
　　1.通過靶向RNA干擾實驗確定在三陰乳腺癌細胞MDA-MB-231中干擾較理想的siRNA，然后根據(jù)實驗結(jié)果確定進行細胞流式檢測的siRNA。
　　2.通過篩選出來的siRNA靶向和hiwi基因干擾，了解干擾hiwi對三陰乳腺癌細胞MDA-MB-231凋亡的影響，來探討hiwi的RNA干擾對三陰乳腺癌治療的意義。
　　[方法]
　　培養(yǎng)并轉(zhuǎn)染（按照實驗設計分為六組:hiwi10330組、hiwi10

2、085組、hiwi10328組、NC組、GAPDH組和Blank組）三陰乳腺癌細胞MDA-MB-231，在6孔板中細胞密度在1.5×105～4×105時作為細胞轉(zhuǎn)染的最佳時機，轉(zhuǎn)染后應用qRT-PCR、Western-Blot分析hiwi基因的mRNA及其靶蛋白的表達情況，根據(jù)結(jié)果評估干擾效果篩選有效的siRNA干擾片段;根據(jù)PCR和Western-blot的結(jié)果選擇hiwi10330組作為干擾組（按照試驗設計分為三組:干擾組，陰性對照

3、組/NC、空白對照組/Blank），同樣在6孔板中細胞密度在1.5×105～4×105時作為細胞轉(zhuǎn)染的最佳時機。在細胞轉(zhuǎn)染24小時后進行細胞流式檢測各實驗組細胞凋亡率。
　　[結(jié)果]
　　1.靶向hiwi基因的siRNA干擾后，hiwi10330組中的mRNA的表達量明顯降低(P＜0.05)，Hiwi基因的靶蛋白的表達也出現(xiàn)了明顯的抑制(P＜0.05)。
　　2.靶向hiwi基因的siRNA干擾后，hiwi10330組