TO901317促進(jìn)MCF-7與MDA-MB-231人乳腺癌細(xì)胞凋亡的研究.pdf

1、研究背景:乳腺癌是一種常見的惡性腫瘤，近幾年有研究指出孤兒受體家族中的肝X受體α(LXRα)與乳腺癌的發(fā)生有著密切的關(guān)系，其中肝X受體激動劑TO901317尤其對LXRα具有高親和力，可抑制多種腫瘤細(xì)胞包括乳腺癌的增殖。最近有文獻(xiàn)進(jìn)一步指出 TO901317還能誘導(dǎo)前列腺癌和黑色素瘤細(xì)胞凋亡。
　　目的:研究肝X受體激動劑TO901317對人乳腺癌細(xì)胞凋亡的影響以及對細(xì)胞內(nèi)LXRα、TTP和NF-κB p65等表達(dá)的作用，為乳腺癌

2、的分子靶向治療提供新的思路。
　　方法:1.使用不同濃度(0μM,10μM,20μM,40μM) TO901317處理MCF-7和MDA-MB-231人乳腺癌細(xì)胞不同時間(0h,12h,24h,48h)，用MTT法觀察細(xì)胞的活性。2.用流式細(xì)胞術(shù)以及Hoechst染色檢測不同濃度(0μM,10μM,20μM,40μM) TO901317處理MCF-7和MDA-MB-231細(xì)胞不同時間(0h,12h,24h,48h)后細(xì)胞凋亡的表現(xiàn)

3、。3. RT-qPCR檢測TO901317處理MCF-7和MDA-MB-231細(xì)胞的量效組和時效組中LXRα和Bcl-2 mRNA的改變；Western blot檢測LXRα和細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2、Caspase3和Cleaved-caspase3等表達(dá)的差異。4.通過生物信息學(xué)軟件Interactome3D和STRING，在線預(yù)測了LXRα、TTP和NF-κB p65三者之間的關(guān)系。5. RT-PCR檢測TO901317

4、處理MCF-7細(xì)胞的量效組和時效組中TTP和NF-κB p65 mRNA表達(dá)的改變。
　　結(jié)果:隨著TO901317處理濃度的增加和處理時間的延長，對細(xì)胞的活性抑制作用逐漸增強，凋亡現(xiàn)象逐漸明顯。當(dāng)細(xì)胞處理24h，濃度在20μM時，對細(xì)胞的活性抑制約為50％，且伴隨明顯的細(xì)胞凋亡形態(tài)，因此，TO901317量效組采納24h作為處理時間，時效組采用20μM作為細(xì)胞處理濃度。與此同時，RT-qPCR檢測發(fā)現(xiàn)，TO901317可上調(diào)LX

5、RαmRNA水平，下調(diào)Bcl-2 mRNA表達(dá)。Western blot檢測除有上述一致的趨勢外，還進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)TO901317可促使凋亡蛋白Bax、Cleaved-caspase3表達(dá)增多，進(jìn)一步證實TO901317促進(jìn)兩種細(xì)胞凋亡。通過生物信息學(xué)在線預(yù)測結(jié)果顯示，LXRα、TTP和NF-κB p65三者之間可能存有直接或間接的相互作用。RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn)TO901317可上調(diào)TTP mRNA表達(dá)，并下調(diào)NF-κB p65 mRNA水