低氧誘導乳腺癌MDA-MB-231細胞遷移及其作用機制研究.pdf

1、乳腺癌已成為女性發(fā)病率最高的癌癥，其中“三陰性”乳腺癌因極易發(fā)生遠處轉移，是乳腺癌預后不良或死亡的關鍵和核心。細胞遷移作為轉移的關鍵步驟已成為了研究腫瘤轉移的重要方法。研究表明，惡性腫瘤細胞遷移能力的大小受腫瘤低氧微環(huán)境的影響，并與低氧誘導因子HIF-1α的穩(wěn)定性和粘附分子vimentin表達上調密切相關。腫瘤低微環(huán)境中存在持續(xù)低氧和間歇低氧兩種低氧環(huán)境，它們以不同方式影響著腫瘤。然而，目前低氧在腫瘤轉移中的作用仍具爭議性，并且不同的低

2、氧環(huán)境是如何誘導HIF-1α和vimentin表達，促進“三陰性”乳腺癌細胞轉移的機制尚不清楚。本文通過構建不同的低氧細胞模型，比較其對“三陰性”乳腺癌遷移的影響，為探索“三陰性”乳腺癌轉移機制和抗轉移治療提供新的思路。
　　目的:
　　1.明確不同的低氧環(huán)境對人“三陰性”乳腺癌細胞株MDA-MB-231遷移與增殖的影響；
　　2.明確不同低氧環(huán)境下，MDA-MB-231細胞HIF-1α和vimentin表達情況；

3、r>　　3.探討間歇低氧環(huán)境下MDA-MB-231細胞的遷移機制。
　　方法:
　　構建常氧、持續(xù)低氧、間歇低氧三種細胞模型；采用劃痕實驗和 Transwell小室遷移實驗比較人“三陰性”乳腺癌MDA-MB-231細胞株在三種細胞模型中的遷移水平；CCK8法評估細胞增殖在遷移實驗中的作用；RT-QPCR和western blot分別檢測HIF-1α和vimentin在不同低氧細胞模型中的mRNA和蛋白表達水平；在此基礎上結合

4、siHIF-1α干擾HIF-1α表達，探索低氧環(huán)境下細胞的遷移機制。
　　結果:
　　1.間歇低氧對細胞遷移的影響與循環(huán)數(shù)有關，在10循環(huán)時細胞的遷移率最高，且顯著高于持續(xù)低氧和常氧組；
　　2.間歇低氧抑制細胞增殖，持續(xù)低氧在低氧48小時后其增值抑制效應才較為明顯，且隨時間的延長抑制作用更明顯；
　　3.遷移實驗48小時內，間歇低氧10循環(huán)細胞的HIF-1α蛋白有效積累量高于持續(xù)低氧細胞；
　　4. HI

5、F-1α mRNA在間歇低氧組細胞和持續(xù)低氧組細胞中表達無明顯差異，但HIF-1αmRNA在間歇低氧復氧階段顯著高于相應低氧階段；
　　5.間歇性低氧細胞的Vimentin蛋白呈恒定高表達，而持續(xù)低氧細胞的Vimentin蛋白表達不穩(wěn)定；
　　6. Vimentin mRNA在間歇低氧組細胞中的表達顯著高于持續(xù)低氧組細胞；
　　7. SiRNA干擾間歇低氧細胞的HIF-1α表達后，其Vimentin蛋白下調，細胞遷移能