滅活仙臺(tái)病毒 Tianjin 株誘導(dǎo)人乳腺癌MDA-MB-231 細(xì)胞和宮頸癌 HeLa 細(xì)胞凋亡機(jī)制的研究.pdf

1、目的：近年來，利用病毒治療腫瘤取得了巨大進(jìn)展。仙臺(tái)病毒Tianjin株是仙臺(tái)病毒新基因型。本論文擬采用紫外線滅活仙臺(tái)病毒 Tianjin株（以下簡稱UV-Tianjin）感染人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞和人宮頸癌HeLa細(xì)胞，通過檢測細(xì)胞的凋亡情況及凋亡發(fā)生的可能機(jī)制來評(píng)價(jià) UV-Tianjin的抗腫瘤作用，以期為病毒抗腫瘤作用機(jī)制研究及開發(fā)新的治療乳腺癌和宮頸癌的生物制劑提供參考依據(jù)。
　　方法：用不同滴度UV-Tianji

2、n分別感染人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231和人宮頸癌細(xì)胞HeLa，24小時(shí)后，（1）MTT法檢測不同滴度UV-Tianjin（MOI：10，20，40，80，160，320）對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞和人正常乳腺上皮細(xì)胞MCF10A，或HeLa細(xì)胞增殖的影響；（2）Hoechst染色熒光顯微鏡觀察UV-Tianjin（MOI：40，80）感染后MDA-MB-231細(xì)胞或 HeLa細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變；（3） AnnexinⅤ-FITC/PI

3、標(biāo)記流式細(xì)胞儀檢測 UV-Tianjin（MOI：20，40，80）誘導(dǎo)MDA-MB-231細(xì)胞或 HeLa細(xì)胞產(chǎn)生凋亡的凋亡率；（4）分光光度法檢測UV-Tianjin（MOI：20，40，80）感染后MDA-MB-231細(xì)胞或 HeLa細(xì)胞中Caspase-3、-8和-9的活性變化；（5）JC-10染色流式細(xì)胞儀檢測UV-Tianjin（MOI：5，20，80）感染后MDA-MB-231細(xì)胞或UV-Tianjin（MOI：20，40

4、，80）感染后HeLa細(xì)胞線粒體膜電位的變化；（6）Western blot檢測UV-Tianjin（MOI：20，80）感染后MDA-MB-231細(xì)胞中Bcl-2、Bax、細(xì)胞色素c、caspase-9、Fas、FasL、caspase-8和caspase-3蛋白表達(dá)水平或UV-Tianjin（MOI：20，40，80）感染后HeLa細(xì)胞中細(xì)胞色素c、APAF-1、caspase-9、Fas、FasL、FADD、caspase-8和c

5、aspase-3蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：（1）MTT檢測結(jié)果顯示 UV-Tianjin能夠抑制 MDA-MB-231細(xì)胞或HeLa細(xì)胞的增殖，且呈劑量依賴性；而對(duì)正常乳腺上皮細(xì)胞MCF10A無明顯抑制作用；（2）Hoechst染色結(jié)果顯示滅活病毒組MDA-MB-231細(xì)胞或HeLa細(xì)胞均發(fā)生了明顯的形態(tài)學(xué)變化：細(xì)胞核致密濃染，呈高亮的藍(lán)色熒光，且具有劑量依賴性趨勢；（3）AnnexinⅤ-FITC/PI標(biāo)記流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示

6、滅活病毒組MDA-MB-231細(xì)胞或HeLa細(xì)胞的凋亡率呈劑量依賴性升高（P<0.01）；（4）分光光度法檢測結(jié)果顯示滅活病毒組 MDA-MB-231細(xì)胞或 HeLa細(xì)胞中caspase-3，-8和-9的活性增加且呈劑量依賴性（P<0.05）；（5）JC-10染色流式細(xì)胞儀分析顯示滅活病毒組MDA-MB-231細(xì)胞或HeLa細(xì)胞線粒體膜電位呈劑量依賴性降低，且與細(xì)胞對(duì)照組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.01）；（6）Western blot

7、結(jié)果顯示高劑量滅活病毒組 MDA-MB-231細(xì)胞中 Bcl-2、Bax、細(xì)胞色素 c、caspase-9、Fas、FasL、caspase-8和caspase-3蛋白表達(dá)水平或HeLa細(xì)胞中細(xì)胞色素c、APAF-1、caspase-9、Fas、FasL、FADD、caspase-8和caspase-3蛋白表達(dá)水平與對(duì)照組比較均有顯著差異（P<0.05）。
　　結(jié)論：滅活仙臺(tái)病毒Tianjin株能夠抑制人乳腺癌MDA-MB-231