魚藤素對乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231誘導(dǎo)凋亡的作用與機(jī)制.pdf

1、目的：研究魚藤素對乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231增殖抑制和凋亡誘導(dǎo)作用，探討魚藤素誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡作用與線粒體凋亡途徑的關(guān)系、以及魚藤素對細(xì)胞線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔的作用。
　　 方法：以乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231為研究對象，建立體外實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?。?yīng)用MTT法檢測魚藤素對MDA-MB-231細(xì)胞的增殖抑制作用，并求取中效濃度；AnnexinV-FITC/PI雙染流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率；羅丹明123單染法觀察線粒體膜電位變化；蛋白免疫印

2、跡法（Westernblot）檢測細(xì)胞漿中Cyt c、細(xì)胞內(nèi)Caspase-3、Bcl-2及Bax蛋白水平；Fluo-3/AM熒光指示劑檢測細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度變化；RT-PCR檢測Bcl-2和Bax mRNA水平；分光光度法檢測Caspase-3蛋白酶活性。
　　 結(jié)果：魚藤素對MDA-MB-231細(xì)胞增殖具有明顯抑制作用，呈時效量效依賴關(guān)系（P<0.05）；流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示細(xì)胞早期凋亡率和細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度隨魚藤素濃度的增加

3、而增多；羅丹明123單染流式術(shù)顯示不同濃度魚藤素處理MDA-MB-231細(xì)胞后，細(xì)胞線粒體膜電位隨藥物濃度的增加而降低（P<0.01）；細(xì)胞漿內(nèi)Cyt c及Caspase-3蛋白表達(dá)水平均升高，Caspase-3蛋白酶活性明顯提高，與未處理組相比，具有顯著性差異（P<0.01）。Western Blot和RT-PCR檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)Bcl-2 mRNA和蛋白表達(dá)降低，而Bax表達(dá)增高，
　　 結(jié)論：魚藤素對乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-2